| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRCT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 鼠伤寒沙门氏菌概述 | 第12-16页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌病原学研究进展 | 第13-14页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌流行病学研究进展 | 第14-15页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌诊断方法及预防治疗 | 第15-16页 |
| 2 减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗及疫苗载体研究进展 | 第16-21页 |
| ·减毒沙门氏菌感染细胞机制 | 第16-17页 |
| ·传统的重组沙门氏菌减毒株的构建 | 第17-18页 |
| ·构建重组沙门氏菌减毒株的新战略 | 第18-21页 |
| ·糖依赖性合成LPS O-抗原或LPS核心的部件会导致其在体内表型的延迟表达 | 第19-20页 |
| ·通过脂质A的减毒,获得又安全又具有免疫原性的疫苗 | 第20-21页 |
| 3 鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因缺失株的构建 | 第23-41页 |
| 1 目的和意义 | 第23页 |
| 2 材料 | 第23-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-25页 |
| ·培养基和抗生素 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE相关试剂 | 第24-25页 |
| ·Westren-blot相关试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| 3 实验方法 | 第25-35页 |
| ·rfbN基因左右同源臂的克隆与鉴定 | 第26-28页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·rfbN基因左右同源臂的扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物鉴定 | 第27页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第27页 |
| ·rfbN基因左右同源臂的融合 | 第27-28页 |
| ·重组自杀性质粒pYA4286-△rfbN的构建 | 第28-30页 |
| ·rfbN基因左右同源臂融合片段的加A反应 | 第28页 |
| ·质粒pYA4286的提取、酶切与回收 | 第28页 |
| ·rfbN基因左右同源臂融合加A片段与质粒pYA4286酶切片段的连接 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒阳性克隆的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·UK-1 rfbN基因缺失株的构建 | 第30-31页 |
| ·利用自杀性质粒介导的同源重组方法构建UK-1 rfbN基因缺失株 | 第30-31页 |
| ·rfbN基因缺失株LPS图谱构建 | 第31-32页 |
| ·样品处理 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·银染 | 第32页 |
| ·rfbN缺失株的回补 | 第32-35页 |
| ·回补重组质粒15a-rfbN的构建 | 第32-34页 |
| ·重组质粒15a-rfbN转化△rfbN缺失株 | 第34页 |
| ·回补株LPS图谱的构建 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·rfbN左右同源臂的扩增 | 第35页 |
| ·构建重组质粒pYA4286-△rfbN | 第35-36页 |
| ·rfbN基因缺失株的筛选和鉴定 | 第36-37页 |
| ·回补重组质粒15a-rfbN的构建 | 第37-38页 |
| ·rfbN基因缺失回补株的筛选和鉴定 | 第38-39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 阿拉伯糖调控rfbN基因表达延迟减毒株的构建 | 第41-53页 |
| 1 目的和意义 | 第41页 |
| 2 材料 | 第41页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| 3 实验方法 | 第41-47页 |
| ·重组质粒pYA3700-rfbN的构建 | 第42-44页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·rfbN基因的PCR扩增与回收 | 第42-43页 |
| ·质粒pYA3700的提取及质粒pYA3700、rfbN基因的酶切与回收 | 第43页 |
| ·pYA3700质粒和rfbN基因酶切片段的连接 | 第43页 |
| ·pYA3700-rfbN连接产物转化E.coli c7232 | 第43页 |
| ·pYA3700-rfbN重组质粒阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组自杀性质粒pYA4286-△pagL-TT araC P_(BAD)rfbN的构建 | 第44-46页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·TT araC P_(BAD)rfbN片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·TT araC P_(BAD)rfbN的扩增片段和pYA4286-△pagL质粒的酶切及连接 | 第45页 |
| ·TT araC P_(BAD)rfbN扩增片段和pYA4286-△pagL质粒连接产物转化E.colic7232 | 第45页 |
| ·重组自杀性质粒pYA4286-△pagL-TT araC P_(BAD)rfbN阳性转化子的菌落PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·△rfbN△ pagL：：TT araC P_(BAD)rfbN突变株的构建 | 第46页 |
| ·△rfbN△ pagL：：TT araC P_(BAD)rfbN突变株LPS图谱构建 | 第46-47页 |
| ·Western blot检测△rfbN△pagL：：TT araC P_(BAD)rfbN突变株的LPS | 第47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-50页 |
| ·重组质粒pYA3700-rfbN的构建 | 第47-48页 |
| ·重组自杀性质粒pYA4286-△pagL-TT araC P_(BAD)rfbN的构建 | 第48-49页 |
| ·△rfbN△ pagL：：TT araC P_(BAD)rfbN突变株的构建 | 第49页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌UK-1 rfbN基因突变株LPS图谱的构建 | 第49-50页 |
| 5 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 鼠伤寒沙门氏菌rfbN突变株生物学特性的研究 | 第53-63页 |
| 1 目的和意义 | 第53页 |
| 2 材料 | 第53-54页 |
| ·试剂、细胞和实验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂的配制 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| 3 实验方法 | 第54-56页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株生长曲线的测定 | 第54页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株运动性 | 第54页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株对多粘菌素B敏感性 | 第54页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株毒力测定 | 第54-55页 |
| ·测定突变株CFU | 第54-55页 |
| ·接种 | 第55页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rbfN基因突变株粘附力与侵袭力测定 | 第55-56页 |
| 4 结果分析 | 第56-61页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株生长曲线的测定 | 第56-57页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株运动性 | 第57-58页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株对多粘菌素B敏感性 | 第58-59页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株毒力测定 | 第59-60页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌rfbN基因突变株粘附力和入侵力的测定 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
