| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 中英文缩写词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·犬细小病毒病的病原学 | 第11-13页 |
| ·CPV 的形态特征与理化特点 | 第11-12页 |
| ·CPV 的血凝特性 | 第12页 |
| ·CPV 的基因组结构与编码的蛋白 | 第12-13页 |
| ·犬细小病毒病的发病机理 | 第13页 |
| ·犬细小病毒株的出现以及在它们的分布 | 第13-14页 |
| ·犬细小病毒病的流行病学 | 第14-15页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第15-16页 |
| ·临床症状 | 第15-16页 |
| ·病理变化 | 第16页 |
| ·犬细小病毒的实验室诊断 | 第16-18页 |
| ·电子显微镜(EM) | 第16-17页 |
| ·病毒的分离 | 第17页 |
| ·血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI） | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第17页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第17-18页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP) | 第18页 |
| ·核酸测序 | 第18页 |
| ·犬细小病毒病的预防与控制 | 第18-19页 |
| ·本试验研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 犬细小病毒 PCR 检测方法的建立与应用 | 第21-29页 |
| ·材料与方法 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·待检病料 | 第21页 |
| ·主要生化试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂配制 | 第21-22页 |
| ·主要设备 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-23页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·样品DNA的提取 | 第22页 |
| ·PCR 最佳退火温度条件优化 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增片段的测序与分析 | 第23页 |
| ·PCR 特异性试验 | 第23页 |
| ·PCR 敏感性试验 | 第23页 |
| ·临床样品的 PCR 检测 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-27页 |
| ·最佳退火温度条件优化 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增片段的测序与分析结果 | 第24-26页 |
| ·PCR 特异性试验结果 | 第26页 |
| ·PCR 敏感性试验结果 | 第26-27页 |
| ·临床应用结果 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 犬细小病毒 VP2 基因克隆分析及原核表达 | 第29-50页 |
| ·材料和方法 | 第29-40页 |
| ·材料 | 第29-33页 |
| ·试验病料 | 第29页 |
| ·试验菌种与载体 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要生化试剂 | 第30页 |
| ·试剂和培养基的配制 | 第30-31页 |
| ·抽提质粒缓冲液和溶液的配制 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE 相关试剂配制 | 第31-32页 |
| ·蛋白纯化与复性主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-40页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·样品 DNA 的提取 | 第33页 |
| ·VP2 基因的 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·VP2 基因的 PCR 扩增产物纯化 | 第34页 |
| ·VP2 基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·重组质粒 pGEM-T-VP2 的小量制备 | 第35页 |
| ·重组质粒 pGEM-T-VP2 的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·表达载体 pET32a-VP2 的构建 | 第36页 |
| ·表达载体 pET32a-VP2 的双酶切鉴定 | 第36页 |
| ·目的基因 VP2 在 BL21 中的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第37页 |
| ·表达条件的优化 | 第37页 |
| ·表达蛋白的纯化与复性 | 第37-39页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| ·表达 CPV-VP2 蛋白反应性与免疫性的检测 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-48页 |
| ·VP2 基因的 PCR 扩增结果 | 第40-41页 |
| ·重组 pGEM-T-VP2 的双酶切鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·重组 pGEM-T-VP2 的测序分析结果 | 第42-43页 |
| ·VP2 基因核苷酸序列同源性分析结果 | 第42-43页 |
| ·VP2 基因分子进化树分析结果 | 第43页 |
| ·重组 pET32a-VP2 双酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·表达蛋白的 SDS-PAGE 结果 | 第44页 |
| ·诱导表达时间的优化结果 | 第44-45页 |
| ·IPTG 诱导浓度的优化结果 | 第45页 |
| ·蛋白的表达形式分析结果 | 第45页 |
| ·VP2 蛋白的纯化结果 | 第45-47页 |
| ·蛋白浓度的测定结果 | 第47页 |
| ·表达 VP2 蛋白反应性的检测 | 第47页 |
| ·表达 VP2 蛋白免疫原性的检测 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·VP2 基因 | 第48页 |
| ·VP2 蛋白 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯化与复性 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 犬细小病毒 VP2 蛋白间接 ELISA 方法的建立与应用 | 第50-56页 |
| ·材料和方法 | 第50-52页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·试验设备 | 第50页 |
| ·主要的试剂配制 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-52页 |
| ·CPV 抗体检测间接 ELISA 相关条件的确定 | 第51-52页 |
| ·重复性试验 | 第52页 |
| ·CPV 间接 ELISA 检测阴、阳性的判定标准 | 第52页 |
| ·CPV 间接 ELISA 临床应用 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·表达 VP2 蛋白最佳包被浓度与犬血清最佳稀释倍数的确定 | 第52-53页 |
| ·HPR-羊抗犬 Ig G 浓度的确定 | 第53页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第53页 |
| ·包被液的确定 | 第53-54页 |
| ·重复性试验 | 第54页 |
| ·CPV 间接 ELISA 检测阴、阳性的判定标准 | 第54页 |
| ·CPV 间接 ELISA 临床应用 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
