| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-30页 |
| 1 课题的提出 | 第16-17页 |
| 2 梨果实品质研究进展 | 第17-28页 |
| ·梨果实中石细胞研究进展 | 第17-21页 |
| ·梨石细胞的形成发育过程及其分布特点 | 第17-18页 |
| ·梨石细胞与果实品质 | 第18-19页 |
| ·石细胞形成与木质素代谢 | 第19-21页 |
| ·果实色泽研究进展 | 第21-24页 |
| ·果实的几种主要色泽的研究进展 | 第21页 |
| ·砂梨果实褐皮的研究进展 | 第21-22页 |
| ·基于果树芽变的分子生物学研究 | 第22-23页 |
| ·高通量测序技术的发展及其在植物中的应用 | 第23-24页 |
| ·果实有机酸研究进展 | 第24-28页 |
| ·果实中的有机酸种类及含量 | 第24-25页 |
| ·果实中的有机酸代谢 | 第25-26页 |
| ·参与果实有机酸代谢关键酶的研究进展 | 第26-28页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 砂梨石细胞形成相关基因PpCCR的克隆、表达及功能分析 | 第30-52页 |
| 1 前言 | 第30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-36页 |
| ·试验材料 | 第30页 |
| ·试剂、菌株及质粒载体 | 第30-31页 |
| ·石细胞在梨果实中的动态发育规律 | 第31页 |
| ·样品采集 | 第31页 |
| ·石细胞的分离、测定和观察 | 第31页 |
| ·木质素含量测定 | 第31页 |
| ·与木质素合成相关的PpCCR基因及其他家族成员的克隆 | 第31-33页 |
| ·RNA提取及cDNA合成 | 第31-32页 |
| ·PpCCR基因片段的获得 | 第32页 |
| ·PpCCR基因的5'和3'RACE扩增 | 第32-33页 |
| ·PpCCRx和PpCCRx2基因的扩增 | 第33页 |
| ·基因的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·与木质素合成相关的PpCCR基因的原核表达分析 | 第33-34页 |
| ·原核表达载体pET-CCR的构建 | 第33页 |
| ·pET-CCR表达产物SDS-PAGE检测 | 第33-34页 |
| ·PpCCR基因在两个梨品种中的表达模式分析 | 第34页 |
| ·携带PpCCR、PpCCRx基因的超表达载体构建 | 第34页 |
| ·拟南芥遗传转化 | 第34-36页 |
| ·拟南芥种植 | 第34-35页 |
| ·农杆菌的准备 | 第35页 |
| ·拟南芥的转化及阳性植株的筛选 | 第35页 |
| ·纯合系转基因拟南芥的获得 | 第35-36页 |
| ·转基因拟南芥的表型分析 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-48页 |
| ·石细胞在‘桂花’和‘脆绿’梨果实中的动态发育规律 | 第36-37页 |
| ·‘桂花’和‘脆绿’梨果实中木质素含量在果实发育期的变化 | 第37-38页 |
| ·砂梨果实中与木质素合成相关的PpCCR基因家族的克隆及生物信息学分析 | 第38-43页 |
| ·PpCCR基因的克隆 | 第38页 |
| ·PpCCRx和PpCCRx2基因的获得 | 第38-40页 |
| ·PpCCR基因的生物信息学分析 | 第40-42页 |
| ·PpCCR、PpCCRx、PpCCRx2基因之间的关系分析 | 第42-43页 |
| ·与木质素合成相关的PpCCR基因在‘桂花’和‘脆绿’果实中的表达模式分析 | 第43-44页 |
| ·与木质素合成相关的PpCCR基因家族在梨果实中的组织表达特异性 | 第44页 |
| ·pET-CCR原核表达载体构建及重组蛋白表达分析 | 第44-45页 |
| ·PC1301、PCx1301载体构建、转化拟南芥及阳性苗获得 | 第45-47页 |
| ·拟南芥WT、OEC和OECx的表型分析 | 第47-48页 |
| ·转基因植株的生长状况分析 | 第47页 |
| ·WT、OEC和OECx植株木质部差异分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·砂梨果实中石细胞发育与木质素的关系 | 第48页 |
| ·砂梨果实CCR基因家族三个成员在石细胞形成中的作用 | 第48-50页 |
| ·砂梨果实中的PpCCR、PpCCRx基因功能验证 | 第50-52页 |
| 第三章 PpCCR基因上游启动子的克隆、分析及相关调节转录因子的筛选 | 第52-65页 |
| 1 前言 | 第52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-55页 |
| ·试验材料 | 第52页 |
| ·PpCCR基因上游启动子的克隆 | 第52-53页 |
| ·砂梨基因组DNA的提取及PpCCR在基因组中的扩增 | 第52页 |
| ·PpCCR基因启动子克隆 | 第52-53页 |
| ·PpCCR启动子转基因载体的构建及转化野生型拟南芥 | 第53页 |
| ·GUS活性组织化学染色检测 | 第53-54页 |
| ·潜在的调节PpCCR基因的转录因子的筛选 | 第54-55页 |
| ·两个砂梨品种‘威宁’和‘脆绿’石细胞含量分析 | 第54页 |
| ·PpCCR基因在‘威宁’和‘脆绿’果实中的表达模式分析 | 第54页 |
| ·砂梨中WRKY基因在两个品种中的表达分析 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-62页 |
| ·PpCCR基因上游启动子序列分析 | 第55-56页 |
| ·PpCCR基因启动子上元件预测 | 第56-58页 |
| ·PpCCR基因启动子转化载体构建及转基因植株的获得 | 第58-59页 |
| ·PpCCR基因启动子转化拟南芥后的植株分析 | 第59页 |
| ·与PpCCR基因启动子相互作用的WRKY转录因子的筛选 | 第59-62页 |
| ·两个砂梨品种‘威宁’和‘脆绿’果实中石细胞含量变化 | 第59-60页 |
| ·PpCCR基因及WRKY转录因子家族部分成员在‘威宁’和‘脆绿’果实中的表达模式分析 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| ·PpCCR基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第62-63页 |
| ·PpCCR基因启动子的活性鉴定 | 第63页 |
| ·与PpCCR基因启动子相互作用的转录因子的初步筛选 | 第63-65页 |
| 第四章 钙、硼处理对湘南果实石细胞形成的影响 | 第65-71页 |
| 1 前言 | 第65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-66页 |
| ·试验材料与处理 | 第65页 |
| ·两个品种果实石细胞含量的测定 | 第65页 |
| ·各组织元素含量的测定 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-68页 |
| ·分别喷施Ca、B后‘湘南’梨果实石细胞含量变化 | 第66页 |
| ·处理后‘湘南’梨果实在石细胞形成主要时期Ca含量的变化 | 第66-67页 |
| ·处理后‘湘南’梨果实在石细胞形成主要时期B含量的变化 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 ‘湘南’与其绿皮芽变—‘绿皮湘南’的转录组测序比较分析 | 第71-85页 |
| 1 前言 | 第71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-73页 |
| ·试验材料 | 第71页 |
| ·样品采集、表型及基本品质分析 | 第71页 |
| ·RNA-seq库的构建及测序 | 第71-72页 |
| ·测序结果数据分析 | 第72页 |
| ·差异表达基因的real-time PCR验证 | 第72-73页 |
| ·果皮扫描电镜分析 | 第73页 |
| ·PpALDH基因的克隆及分析 | 第73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-80页 |
| ·‘湘南’与‘绿皮湘南’果实的表型分析 | 第73-75页 |
| ·‘湘南’与‘绿皮湘南’果皮颜色及内在品质差异 | 第73-75页 |
| ·‘湘南’与‘绿皮湘南’果皮的扫描电镜观察 | 第75页 |
| ·两个测序文库的建立及文库质量评估 | 第75-76页 |
| ·通过比较转录组筛选差异表达基因 | 第76页 |
| ·部分差异表达基因的real-time PCR验证 | 第76页 |
| ·差异表达基因的Gene Ontology(GO)功能显著性富集分析 | 第76-78页 |
| ·差异表达基因涉及的代谢途径(Pathway)显著性富集分析 | 第78-79页 |
| ·差异表达基因gi|149780242(ALDH)的克隆和分析 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-85页 |
| ·‘湘南’和‘绿皮湘南’果皮性状差异的生理机制探讨 | 第80-81页 |
| ·导致绿皮芽变性状机理的探讨 | 第81-85页 |
| ·类黄酮生物合成途径 | 第81-82页 |
| ·苯丙氨酸合成途径 | 第82页 |
| ·蜡质相关代谢途径 | 第82-85页 |
| 第六章 砂梨果实中柠檬酸优势机理研究 | 第85-97页 |
| 1 前言 | 第85页 |
| 2 材料与方法 | 第85-89页 |
| ·试验材料 | 第85页 |
| ·两个品种果实主要有机酸和糖含量测定 | 第85-87页 |
| ·定性分析 | 第85-86页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第86页 |
| ·样品的提取与测定 | 第86页 |
| ·糖酸的GC-FID分析的色谱条件 | 第86-87页 |
| ·总RNA提取及cDNA第一链的合成 | 第87页 |
| ·real-time PCR表达分析 | 第87页 |
| ·相关酶活的测定 | 第87-89页 |
| ·酶液的制备 | 第87-88页 |
| ·测定方法 | 第88-89页 |
| 3 结果与分析 | 第89-95页 |
| ·果实发育过程中‘雁荡雪梨’和‘梗头青’中的有机酸积累 | 第89-90页 |
| ·有机酸代谢和贮藏相关的基因的克隆、分析 | 第90-91页 |
| ·‘雁荡雪梨’中有机酸代谢相关基因表达及其相应的酶活性分析 | 第91-92页 |
| ·‘梗头青’中有机酸代谢相关基因表达及其相应的酶活性分析 | 第92-94页 |
| ·‘雁荡雪梨’和‘梗头青’中有机酸贮藏相关的基因的表达分析 | 第94-95页 |
| 4 讨论 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-114页 |
| 图版及说明 | 第114-118页 |
| 附录 | 第118-135页 |
| 附录Ⅰ:本文实验涉及的分子生物学操作 | 第118-124页 |
| 附录Ⅰ-Ⅰ:CTAB法提取植物总RNA | 第118页 |
| 附录Ⅰ-Ⅱ:CTAB法提取植物基因组DNA | 第118-120页 |
| 附录Ⅰ-Ⅲ:碱裂解法小量提取质粒DNA | 第120-121页 |
| 附录Ⅰ-Ⅳ:大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2法) | 第121页 |
| 附录Ⅰ-Ⅴ:TA克隆、质粒转化及重组质粒的蓝白斑筛选 | 第121-122页 |
| 附录Ⅰ-Ⅵ:根癌农杆菌感受态的制备(CaCl_2法)及中间载体的导入 | 第122-124页 |
| 附录Ⅱ:RNA-Seq筛选出的差异表达基因 | 第124-131页 |
| 附录Ⅲ:差异表达基因涉及的代谢途径 | 第131-134页 |
| 附录Ⅳ:攻读博士学位期间发表及待发表论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
