| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 1 高效表达系统 | 第9-10页 |
| ·高效表达载体 | 第9页 |
| ·表达系统 | 第9-10页 |
| 2 TEM8和VEGFR | 第10-11页 |
| ·TEM8 | 第10页 |
| ·VEGFR | 第10-11页 |
| ·临床治疗 | 第11页 |
| 3 培养方式 | 第11页 |
| 4 本课题研究内容 | 第11-13页 |
| 第一部分 GS系统构建以及稳定细胞系筛选 | 第13-30页 |
| 1 材料 | 第13-14页 |
| ·细胞株 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·主要化学试剂配方 | 第13-14页 |
| ·主要仪器设备 | 第14页 |
| 2 方法 | 第14-23页 |
| ·引物设计 | 第14-15页 |
| ·p-IR-TV-IgG2和pHGS1.0-TV-IgG2表达载体的构建 | 第15-21页 |
| ·细胞培养和转染 | 第21-22页 |
| ·转染细胞加压筛选 | 第22页 |
| ·单克隆细胞系 | 第22页 |
| ·ELISA定性检测重组蛋白表达水平 | 第22页 |
| ·IgG2试剂盒定量分析细胞表达水平 | 第22-23页 |
| ·Western Blot分析 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-28页 |
| ·p-IR-TV-IgG2和pHGS1.0-TV-IgG2两种质粒的构建与鉴定 | 第23页 |
| ·稳定细胞系荧光强度 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的表达水平分析 | 第24-25页 |
| ·免疫印迹分析表达蛋白 | 第25页 |
| ·ELISA定性分析筛选单克隆 | 第25-27页 |
| ·IgG2试剂盒定量分析20株细胞系蛋白表达量 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 5 结论 | 第29-30页 |
| 第二部分 GS系统细胞系生长代谢 | 第30-52页 |
| 1 材料 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-35页 |
| ·pHGS1.0-TV-IgG细胞静置贴壁培养 | 第30页 |
| ·pHGS1.0-TV-IgG细胞系悬浮适应培养 | 第30页 |
| ·pHGS1.0-TV-IgG细胞系无血清批次培养 | 第30-31页 |
| ·无血清培养基优化 | 第31-33页 |
| ·活细胞密度及细胞活力的检测 | 第33页 |
| ·培养上清中TV-IgG2表达量的检测与计算 | 第33页 |
| ·无血清悬浮分批培养的细胞生长及代谢动力学模型的建立 | 第33-35页 |
| ·细胞系在贴壁培养过程稳定性 | 第35页 |
| ·细胞系在优化无血清悬浮培养过程稳定性 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-50页 |
| ·细胞在有血清培养基中贴壁培养生长和代谢 | 第35-37页 |
| ·细胞在悬浮适应阶段培养生长和代谢 | 第37-40页 |
| ·无血清悬浮培养基优化 | 第40-46页 |
| ·CHO工程细胞系在不同培养基中培养效果 | 第46-47页 |
| ·分批悬浮培养代谢动力模型建立 | 第47-50页 |
| ·细胞连续批次贴壁培养下TV-IgG2表达稳定性 | 第50页 |
| ·细胞连续批次悬浮培养下TV-IgG2表达稳定性 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 第三部分 WAVE无血清流加培养细胞系生长代谢 | 第52-58页 |
| 1 材料 | 第52页 |
| ·细胞系 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要设备 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| ·种子细胞培养 | 第52页 |
| ·分批培养 | 第52页 |
| ·WAVE流加培养 | 第52页 |
| ·细胞生长和代谢指标 | 第52页 |
| ·起始细胞密度 | 第52页 |
| ·培养温度 | 第52页 |
| ·pH值调控 | 第52-53页 |
| ·流加速度 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-56页 |
| ·接种密度对细胞生长和代谢影响 | 第53页 |
| ·培养温度对细胞生长和代谢影响 | 第53-54页 |
| ·pH对细胞生长密度及其代谢影响 | 第54-55页 |
| ·流加速度对细胞密度及其蛋白表达量影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 总结 | 第58-59页 |
| 1 现阶段已经获得成果 | 第58页 |
| 2 下一步工作重点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 发表文章和专利 | 第66页 |
