| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第1章 DNA损伤修复与MCPH1 | 第12-31页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·DNA损伤修复网络 | 第12页 |
| ·γH2AX依赖的DNA修复途径 | 第12-15页 |
| ·BRCT结构域与DNA损伤修复 | 第15-23页 |
| ·BRCT结构域的命名 | 第15-16页 |
| ·BRCT domain的结构组装 | 第16-18页 |
| ·BRCT结构域的功能 | 第18-23页 |
| ·MCPH1的功能简介 | 第23-29页 |
| ·MCPH1基因与疾病 | 第23页 |
| ·蛋白MCPH1参与到DNA修复途径 | 第23-28页 |
| ·MCPH1是DNA修复途径中的早期调节蛋白 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 第2章 人源MCPH1串联BRCT结构域的结构与功能研究 | 第31-56页 |
| ·实验材料与实验方法 | 第31-40页 |
| ·MCPH1串联BRCT结构域的边界选择 | 第31页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·目的基因的胶回收 | 第32-33页 |
| ·质粒抽提 | 第33-34页 |
| ·目的片段与质粒的双酶切 | 第34页 |
| ·连接反应 | 第34页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| ·定点突变体的构建 | 第35页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第35-36页 |
| ·MCPH1与γH2AX的相互作用-荧光偏振实验 | 第36-37页 |
| ·晶体的生长与优化 | 第37-38页 |
| ·晶体数据的收集,结构解析与修正 | 第38页 |
| ·GST pull-down实验及蛋白质印迹(Western blotting) | 第38-40页 |
| ·实验结果与讨论 | 第40-51页 |
| ·MCPH1串联BRCT结构域克隆,表达和纯化 | 第40页 |
| ·MCPH1串联BRCT与γH2AX小肽的相互作用 | 第40-41页 |
| ·MCPH1串联BRCT结构域以及它与γH2AX复合物的晶体结构 | 第41-44页 |
| ·MCPH1串联BRCT中特别的pSer结合位点 | 第44-45页 |
| ·R-X-X-N是一个新的γH2AX结合motif | 第45-46页 |
| ·MCPH1串联BRCT结构域在pSer+3有选择性 | 第46-48页 |
| ·MCPH1与MDC介导不同的DNA修复途径 | 第48-49页 |
| ·MCPH1特异性地结合内源性γH2AX | 第49-50页 |
| ·MCPH1与脑容量的关系 | 第50-51页 |
| ·小结与讨论 | 第51-52页 |
| ·MCPH1把DNA损伤修复与染色质重塑连接起来 | 第51页 |
| ·识别磷酸化小肽的新motif | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 第3章 tRNA甲基转移酶与Trm10 | 第56-67页 |
| ·tRNA的修饰 | 第56-57页 |
| ·tRNA的甲基化修饰 | 第57-58页 |
| ·tRNA的甲基化转移酶 | 第58-63页 |
| ·tRNA m1G9甲基转移酶-Trm10 | 第63-65页 |
| ·Trm10的同源物 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第4章 酿酒酵母scTrm10的结构与功能 | 第67-98页 |
| ·实验材料与实验方法 | 第67-81页 |
| ·酿酒酵母scTrm10蛋白的边界选择 | 第67页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第67-68页 |
| ·目的片段的胶回收与双酶切 | 第68-69页 |
| ·连接与转化 | 第69页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第69-70页 |
| ·scTrm10蛋白的表达与纯化 | 第70页 |
| ·人源蛋白TrmT10C-SDR5C1复合物的克隆,表达与纯化 | 第70页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第70-72页 |
| ·scTrm10的结晶,数据收集与结构解析 | 第72页 |
| ·tRNA的体外转录 | 第72-76页 |
| ·scTrm10甲基转移酶酶活测定 | 第76-77页 |
| ·转录产物tRNA的化学修饰 | 第77-78页 |
| ·凝胶迁移阻滞实验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA) | 第78-79页 |
| ·蛋白的圆二色谱(CD谱) | 第79-80页 |
| ·ITC(Isothermal titration calorimetry)实验 | 第80页 |
| ·限制性蛋白酶酶解实验 | 第80-81页 |
| ·实验结果 | 第81-94页 |
| ·酿酒酵母scTrm10的表达纯化 | 第81页 |
| ·tRNA~(Gly)的转录 | 第81-82页 |
| ·酿酒酵母scTrm10的晶体结构 | 第82-85页 |
| ·酿酒酵母scTrm10的溶液状态 | 第85-88页 |
| ·酿酒酵母scTrm10的N端延伸区域扮演着重要角色 | 第88-90页 |
| ·酿酒酵母scTrm10的活性位点 | 第90-93页 |
| ·酿酒酵母scTrm10酶活结构域中的tRNA结合位点 | 第93-94页 |
| ·小结与讨论 | 第94-97页 |
| ·酿酒酵母scTrm10的催化机制 | 第94-95页 |
| ·人源蛋白Trm10的功能讨论 | 第95-97页 |
| ·展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第103页 |
