| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-37页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·体细胞重编程与转分化研究进展 | 第14-20页 |
| ·体细胞重编程 | 第14-20页 |
| ·克隆技术 | 第14-15页 |
| ·细胞融合重编程 | 第15-16页 |
| ·iPS技术及转录因子 | 第16-17页 |
| ·转分化研究 | 第17-20页 |
| ·神经系统发育 | 第20-26页 |
| ·神经系统发育简介 | 第20-21页 |
| ·神经细胞的发育 | 第21-26页 |
| ·神经干细胞与神经前体细胞 | 第21-22页 |
| ·神经元前体细胞 | 第22-24页 |
| ·神经元 | 第24-25页 |
| ·胶质细胞 | 第25-26页 |
| ·神经退行性疾病及细胞治疗 | 第26-31页 |
| ·神经退行性疾病 | 第26-28页 |
| ·神经退行性疾病的治疗方法 | 第28-31页 |
| ·非细胞治疗方法 | 第28-29页 |
| ·细胞治疗方法 | 第29-31页 |
| ·神经细胞的分化与转化分化研究 | 第31-35页 |
| ·神经细胞的分化与转分化概述 | 第31-32页 |
| ·ES/iPSC诱导为神经干细胞或神经元 | 第32-33页 |
| ·转分化获得神经干细胞或神经前体细胞 | 第33页 |
| ·转分化获得功能性神经元 | 第33-35页 |
| ·本课题选题依据及研究内容 | 第35-37页 |
| 第二章 实验材料与试剂 | 第37-47页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·实验耗材 | 第37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验试剂和试剂盒 | 第38-47页 |
| ·分子实验用试剂 | 第38-39页 |
| ·细胞培养用试剂 | 第39-40页 |
| ·分子实验用溶液配制 | 第40-41页 |
| ·细胞培养液配制 | 第41-45页 |
| ·免疫荧光用溶液配制 | 第45-46页 |
| ·电生理用溶液配制 | 第46-47页 |
| 第三章 实验方法与步骤 | 第47-75页 |
| ·细胞培养 | 第47-51页 |
| ·293T细胞培养 | 第47-48页 |
| ·K562细胞培养 | 第48页 |
| ·U251细胞培养 | 第48页 |
| ·hiPS细胞培养 | 第48-50页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第48-49页 |
| ·人诱导多潜能性干细胞(hiPS)细胞培养 | 第49-50页 |
| ·hiPS细胞诱导神经前体细胞 | 第50页 |
| ·人胎儿皮肤成纤维细胞分离培养 | 第50-51页 |
| ·慢病毒包装 | 第51-60页 |
| ·筛选候选基因 | 第51-54页 |
| ·引物设计合成 | 第51-52页 |
| ·RNA提取 | 第52-53页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第53页 |
| ·PCR反应 | 第53-54页 |
| ·电泳观察 | 第54页 |
| ·慢病毒载体构建 | 第54-58页 |
| ·双酶切 | 第54-55页 |
| ·回收载体及基因片段 | 第55-56页 |
| ·目的DNA片段的连接 | 第56页 |
| ·连接产物转化 | 第56页 |
| ·重组质粒小量提取 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第57页 |
| ·质粒中提和保存 | 第57-58页 |
| ·慢病毒包装和收集 | 第58-60页 |
| ·慢病毒包装 | 第58-59页 |
| ·慢病毒收集 | 第59-60页 |
| ·病毒滴度测试 | 第60页 |
| ·神经元前体细胞(hiNRPs)的诱导过程 | 第60-62页 |
| ·八因子诱导过程 | 第60-61页 |
| ·减少外源因子 | 第61-62页 |
| ·优化诱导培养条件 | 第62页 |
| ·神经元前体细胞(hiNRPs)的鉴定 | 第62-70页 |
| ·反转录PCR鉴定 | 第62-65页 |
| ·实时定量PCR鉴定 | 第65-66页 |
| ·Nestin甲基化分析 | 第66-68页 |
| ·细胞基因组DNA提取 | 第66-67页 |
| ·硫酸氢盐对DNA进行修饰 | 第67页 |
| ·PCR扩增及连接 | 第67页 |
| ·测序结果分析 | 第67-68页 |
| ·核型分析 | 第68页 |
| ·细胞免疫荧光检测 | 第68-69页 |
| ·全基因组表达分析 | 第69-70页 |
| ·神经元前体细胞(hiNRPs)的体外分化和鉴定 | 第70-72页 |
| ·诱导神经元前体细胞(hiNRPs)的体外分化实验 | 第70-71页 |
| ·诱导神经元 | 第70页 |
| ·诱导星形胶质细胞 | 第70-71页 |
| ·诱导少突胶质细胞 | 第71页 |
| ·分化细胞的免疫荧光检测 | 第71页 |
| ·hiNRP细胞分化的神经元电生理检测 | 第71-72页 |
| ·神经元前体细胞(hiNRPs)的移植和鉴定 | 第72-75页 |
| ·神经元前体细胞体内移植实验 | 第72页 |
| ·Morris水迷宫实验 | 第72-73页 |
| ·脑组织切片 | 第73页 |
| ·组织免疫荧光检测 | 第73-75页 |
| 第四章 实验结果 | 第75-102页 |
| ·分离获得人胚胎成纤维细胞和诱导获得人神经前体细胞 | 第75-76页 |
| ·载体构建 | 第76页 |
| ·直接诱导获得人神经元前体细胞 | 第76-79页 |
| ·减少外源因子诱导神经元前体细胞 | 第79-82页 |
| ·优化神经元前体细胞的诱导培养条件 | 第82-84页 |
| ·诱导神经元前体细胞(hiNRPs)的检测 | 第84-92页 |
| ·hiNRPs的形态特点 | 第84-86页 |
| ·RT-PCR和q-PCR检测hiNRPs的基因表达 | 第86-88页 |
| ·免疫荧光法检测hiNRPs的基因表达 | 第88-90页 |
| ·hiNRP细胞核型和成瘤实验检测 | 第90-91页 |
| ·Nestin增强子的甲基化检测 | 第91-92页 |
| ·全基因组表达分析 | 第92-95页 |
| ·hiNRPs的体外分化检测 | 第95-97页 |
| ·电生理检测 | 第97-98页 |
| ·体内分化检测 | 第98-102页 |
| 第五章 讨论 | 第102-107页 |
| 第六章 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-124页 |
| 附录 | 第124-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第128页 |
