| 目录 | 第1-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-18页 |
| ·泰勒虫病的概况 | 第12-14页 |
| ·羊泰勒虫的分类 | 第12-13页 |
| ·羊泰勒虫的传播媒介 | 第13页 |
| ·泰勒虫的形态与致病情况 | 第13-14页 |
| ·羊泰勒虫的诊断方法 | 第14-16页 |
| ·血涂片检查 | 第14页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第14-15页 |
| ·间接荧光抗体技术(IFAT) | 第15页 |
| ·半巢式PCR(semi-nested PCR) | 第15页 |
| ·环介导的恒温扩增技术(LAMP) | 第15-16页 |
| ·酶联免疫反应技术(ELISA) | 第16页 |
| ·羊泰勒虫的研究现状 | 第16-17页 |
| ·研究目标 | 第17-18页 |
| ·吕氏泰勒虫T1SP基因的克隆、生物信息分析和原核表达 | 第17页 |
| ·吕氏泰勒虫T1SP基因在真核细胞的表达与定位 | 第17页 |
| ·T1SP抗原的间接ELISA抗体检测羊泰勒虫方法的建立 | 第17-18页 |
| 第2章 吕氏泰勒虫T1SP基因的克隆、生物信息分析和原核表达 | 第18-34页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第18-19页 |
| ·菌株、载体 | 第18页 |
| ·试验试剂 | 第18页 |
| ·试验仪器 | 第18-19页 |
| ·吕氏泰勒虫T1SP基因的生物信息学分析 | 第19页 |
| ·吕氏泰勒虫T1SP基因的克隆 | 第19-23页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·胶回收 | 第21页 |
| ·pGEM-T Easy载体的连接 | 第21页 |
| ·转化 | 第21-22页 |
| ·pGEM-T-T1SP质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·重组表达质粒pET-30a-T1SP的构建 | 第23-24页 |
| ·双酶切 | 第23页 |
| ·连接 | 第23页 |
| ·PCR鉴定 | 第23-24页 |
| ·pET-30a-T1SP的原核表达 | 第24-25页 |
| ·表达蛋白的纯化与透析 | 第25-26页 |
| ·纯化 | 第25-26页 |
| ·透析 | 第26页 |
| ·Western-blot分析 | 第26-28页 |
| ·SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·转膜(半干转) | 第27-28页 |
| ·羊抗T1SP蛋白多抗的制备 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·T1SP基因的PCR扩增结果 | 第28-29页 |
| ·T1SP基因序列 | 第29页 |
| ·T1SP基因翻译的氨基酸序列 | 第29页 |
| ·T1SP基因抗原表位分析预测 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·Western-blot分析结果 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第3章 吕氏泰勒虫T1SP基因在真核细胞的表达与定位 | 第34-44页 |
| ·材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·T1SP基因的引物设计 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·pEGFP-N1-T1SP重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·Vero细胞的培养与转染 | 第37页 |
| ·细胞爬片的制作与亚细胞定位 | 第37页 |
| ·Western-blot分析重组质粒pEGFP-N1-T1SP的表达 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·T1SP基因的PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pEGFP-N1-T1SP的PCR鉴定 | 第39页 |
| ·脂质体转染 | 第39页 |
| ·重组质粒pEGFP-N1-T1SP在Vero细胞中的定位 | 第39-40页 |
| ·表达与Western-blot分析 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-44页 |
| 第4章 rT1SP抗原的间接ELISA抗体检测羊泰勒虫方法的建立 | 第44-51页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·血清 | 第44页 |
| ·抗原的制备 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·试验仪器 | 第45页 |
| ·抗原的最佳包被浓度 | 第45页 |
| ·血清和酶标抗体的稀释度 | 第45-46页 |
| ·间接ELISA判定标准 | 第46页 |
| ·交叉反应检测 | 第46页 |
| ·临床样品检测 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·抗原的最佳包被浓度 | 第46-47页 |
| ·血清和酶标抗体的稀释度 | 第47页 |
| ·临界值的判定标准 | 第47-48页 |
| ·交叉反应结果 | 第48-49页 |
| ·临床样品检测结果 | 第49页 |
| ·rT1SP蛋白多抗的持续时间 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第61页 |
