符号说明 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
1 前言 | 第13-30页 |
·植物离体芽再生 | 第13-16页 |
·植物细胞全能性 | 第14页 |
·脱分化与再分化 | 第14页 |
·芽再生与茎端分生组织干细胞 | 第14-16页 |
·茎端分生组织基本结构 | 第15页 |
·茎端分生组织干细胞的调控机制 | 第15-16页 |
·芽再生机制的研究的意义 | 第16页 |
·植物激素与离体芽再生 | 第16-21页 |
·植物激素与细胞分化 | 第17页 |
·细胞分裂素与离体芽再生 | 第17-20页 |
·细胞分裂素的合成与降解 | 第17-18页 |
·细胞分裂素氧化酶 CKX3 | 第18页 |
·细胞分裂素信号转导 | 第18-19页 |
·细胞分裂素信号调控芽再生过程 | 第19-20页 |
·生长素与离体芽再生 | 第20页 |
·细胞分裂素与生长素的协同互作 | 第20-21页 |
·表观遗传与离体芽再生 | 第21-22页 |
·表观遗传学与表观遗传现象 | 第21页 |
·表观遗传的一般调控机制 | 第21-22页 |
·表观遗传因子调控植物茎端发育 | 第22页 |
·组蛋白精氨酸甲基化修饰 | 第22-29页 |
·蛋白质精氨酸甲基转移酶 PRMT | 第23-25页 |
·蛋白质精氨酸甲基化修饰 | 第23-24页 |
·PRMT 及其分类 | 第24页 |
·PRMT 广泛调控生命活动 | 第24-25页 |
·PRMT5 调控植物发育过程 | 第25-27页 |
·TypeⅡ型蛋白质精氨酸甲基转移酶 PRMT5 | 第25-26页 |
·PRMT5 的表达模式 | 第26-27页 |
·PRMT5 的功能分析 | 第27页 |
·PRMT5 与组蛋白精氨酸甲基化修饰 | 第27-28页 |
·PRMT5 通过非组蛋白途径调控生物发育 | 第28-29页 |
·本实验的研究意义 | 第29-30页 |
2 材料与方法 | 第30-47页 |
·实验材料 | 第30-31页 |
·植物材料和培养条件 | 第30页 |
·菌株和质粒载体 | 第30页 |
·酶及生化试剂 | 第30-31页 |
·PCR 引物和测序 | 第31页 |
·培养基 | 第31页 |
·实验方法 | 第31-47页 |
·拟南芥的种植和鉴定 | 第31-33页 |
·拟南芥种子的消毒处理 | 第31页 |
·拟南芥的种植和管理 | 第31-32页 |
·拟南芥 DNA 的提取 | 第32页 |
·T DNA 插入型突变体的 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
·拟南芥离体芽再生的组织培养 | 第33页 |
·拟南芥特定基因转录水平分析 | 第33-35页 |
·植物总 RNA 的提取 | 第33-34页 |
·反转录获取 cDNA | 第34-35页 |
·实时荧光定量 PCR 分析基因转录水平 | 第35页 |
·染色质免疫共沉淀(ChIP)实验 | 第35-38页 |
·材料的获取和固定 | 第35-36页 |
·DNA 的释放和超声波破碎 | 第36页 |
·免疫共沉淀 | 第36-37页 |
·ChIP 结果的 qRT-PCR 检测 | 第37-38页 |
·表达载体的构建与转基因植株的获得 | 第38-42页 |
·拟南芥特定基因序列的克隆 | 第38页 |
·大肠杆菌的转化 | 第38-39页 |
·大肠杆菌质粒的提取 | 第39-40页 |
·表达载体的构建 | 第40-41页 |
·农杆菌的转化 | 第41页 |
·拟南芥转基因植株的获得 | 第41-42页 |
·原位杂交实验 | 第42-45页 |
·材料的固定 | 第42页 |
·材料的脱水、透明、浸蜡与包埋 | 第42-43页 |
·切片 | 第43页 |
·标记探针的合成 | 第43-44页 |
·杂交实验 | 第44-45页 |
·杂交后处理 | 第45页 |
·GUS 染色分析基因表达模式 | 第45-47页 |
·GUS 染色方法 | 第45-46页 |
·石蜡切片 | 第46-47页 |
3 结果与分析 | 第47-60页 |
·PRMT5 能够调控拟南芥芽再生过程 | 第47-50页 |
·蛋白质精氨酸甲基化修饰影响芽再生过程 | 第47-48页 |
·prmt5 突变体芽再生表型分析 | 第48-49页 |
·PRMT5 过表达株系芽再生表型分析 | 第49-50页 |
·离体条件下 PRMT5 负调控靶基因 CKX3 | 第50-54页 |
·PRMT5 下游靶基因的筛选 | 第50-52页 |
·芽再生过程中 CKX3 受到 PRMT5 的负调控 | 第52-53页 |
·离体条件下 PRMT5 负调控 CKX3 对细胞分裂素的应答 | 第53-54页 |
·PRMT5 通过催化蛋白精氨酸甲基化修饰调控 CKX3 的表达 | 第54-55页 |
·芽再生过程中 CKX3 的表达模式分析 | 第55-57页 |
·CKX3 调控拟南芥芽再生过程 | 第57-60页 |
·CKX3 功能缺失的芽再生表型分析 | 第57-58页 |
·CKX3 组成型过表达的芽再生表型分析 | 第58-59页 |
·antiCKX3/prmt5-1 株系的芽再生表型分析 | 第59-60页 |
4 讨论 | 第60-63页 |
·PRMT5 对拟南芥芽再生过程的调控作用 | 第60页 |
·CKX3 影响芽再生过程 | 第60-61页 |
·PRMT5 调控 CKX3 表达的机制 | 第61-62页 |
·表观遗传因子调控 CKX3 的表达 | 第62-63页 |
5 结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-73页 |
附录 | 第73-74页 |
致谢 | 第74页 |