| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-36页 |
| ·副猪嗜血杆菌的危害与防治 | 第15-24页 |
| ·病原学 | 第15-16页 |
| ·副猪嗜血杆菌的流行病学 | 第16-18页 |
| ·副猪嗜血杆菌的发病机制 | 第18-20页 |
| ·副猪嗜血杆菌的临床症状 | 第20页 |
| ·副猪嗜血杆菌的诊断 | 第20-22页 |
| ·副猪嗜血杆菌的控制 | 第22-24页 |
| ·副猪嗜血杆菌的耐药性 | 第24-27页 |
| ·副猪嗜血杆菌毒力相关因子研究进展 | 第27-32页 |
| ·脂多糖(LOS) | 第27-28页 |
| ·外膜蛋白(OMP) | 第28-29页 |
| ·细胞致死膨胀毒素(CDT) | 第29-30页 |
| ·Mu噬菌体相关基因 | 第30页 |
| ·唾液酸酶 | 第30-31页 |
| ·可能的毒力相关因子 | 第31-32页 |
| ·副猪嗜血杆菌疫苗研究进展 | 第32-36页 |
| ·灭活疫苗 | 第32-33页 |
| ·亚单位疫苗 | 第33-35页 |
| ·基因缺失疫苗 | 第35-36页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌重要免疫原性蛋白发掘 | 第36-62页 |
| ·研究的目的和意义 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36-41页 |
| ·菌株,质粒和培养条件 | 第36-38页 |
| ·工具酶和试剂 | 第38页 |
| ·培养基及抗生素的配置 | 第38页 |
| ·主要溶液的配置 | 第38-39页 |
| ·引物 | 第39-41页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-47页 |
| ·细菌的复苏增殖及副猪嗜血杆菌基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收和纯化 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第41-42页 |
| ·连接产物的转化 | 第42页 |
| ·质粒的制备 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·副猪嗜血杆菌编码外膜蛋白基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·编码外膜蛋白基因在15种标准血清型菌株中的分布 | 第44页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第44页 |
| ·融合蛋白的表达和纯化 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第44-45页 |
| ·免疫原性外膜蛋白筛选 | 第45页 |
| ·外膜蛋白对仔猪的免疫保护效力实验 | 第45-47页 |
| ·统计分析 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-59页 |
| ·副猪嗜血杆菌重组表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·10种基因在15种标准血清型菌株中的分布 | 第48-49页 |
| ·10种外膜蛋白的表达 | 第49-50页 |
| ·小鼠初步筛选免疫原性蛋白 | 第50-51页 |
| ·免疫原性蛋白对仔猪的免疫保护效力研究 | 第51-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| ·副猪嗜血杆菌外膜蛋白的筛选 | 第59-60页 |
| ·副猪嗜血杆菌亚单位疫苗候选蛋白的筛选 | 第60-61页 |
| ·副猪嗜血杆菌的血清抵抗性 | 第61-62页 |
| 第三章 编码GAPDH蛋白的副猪嗜血杆菌DNA疫苗的构建及免疫效力的研究 | 第62-79页 |
| ·研究的目的和意义 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-64页 |
| ·菌株,质粒和培养条件 | 第62-63页 |
| ·工具酶和试剂 | 第63页 |
| ·培养基及抗生素配制 | 第63页 |
| ·主要溶液的配制 | 第63-64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-68页 |
| ·gapA基因在15种标准血清型中的分布 | 第64页 |
| ·DNA疫苗pCgap的构建 | 第64-65页 |
| ·GAPDH蛋白表达的间接免疫荧光验证 | 第65页 |
| ·DNA疫苗pCgap的免疫 | 第65-66页 |
| ·pCgap免疫后PCR观察在组织中的分布 | 第66页 |
| ·pCgap免疫后RT-PCR观察在组织中的分布 | 第66-67页 |
| ·pCgap免疫后的抗体检测及亚类分析 | 第67页 |
| ·pCgap免疫后细胞因子的测定 | 第67页 |
| ·全血杀菌实验 | 第67页 |
| ·副猪嗜血杆菌血清4型和血清5型攻毒 | 第67页 |
| ·组织切片观察 | 第67页 |
| ·被动免疫实验 | 第67-68页 |
| ·数据分析 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-76页 |
| ·gapA基因在副猪嗜血杆菌中的分布 | 第68-70页 |
| ·DNA疫苗pCgap的构建 | 第70页 |
| ·gapA基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第70-71页 |
| ·DNA疫苗免疫动物后诱导的抗体反应 | 第71-72页 |
| ·DNA疫苗免疫动物后细胞因子的产生 | 第72-73页 |
| ·血清杀菌实验测定 | 第73-74页 |
| ·DNA疫苗免疫之后gapA基因在组织中的表达 | 第74页 |
| ·DNA疫苗诱导的免疫保护效力 | 第74-75页 |
| ·被动免疫保护实验 | 第75-76页 |
| ·组织病理学分析 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-79页 |
| ·关于DNA疫苗表达载体的选择 | 第77页 |
| ·抗体在免疫保护机制中的作用 | 第77页 |
| ·DNA疫苗pCgap诱导较高保护率机制初步探讨 | 第77-78页 |
| ·DNA疫苗pCgap在组织中的转运及表达 | 第78页 |
| ·关于gapA基因的选择 | 第78页 |
| ·DNA疫苗pCgap的总结及展望 | 第78-79页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌GAPDH免疫调节机理研究 | 第79-103页 |
| ·研究的目的和意义 | 第79-80页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·菌株,质粒和细胞培养条件 | 第80页 |
| ·试剂 | 第80页 |
| ·主要培养基及抗生素的配置 | 第80页 |
| ·主要溶液的配置 | 第80-81页 |
| ·实验动物 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-88页 |
| ·外膜蛋白体外刺激小鼠脾细胞 | 第81页 |
| ·rGAPDH蛋白免疫血清的制备 | 第81页 |
| ·淋巴细胞增殖反应 | 第81-82页 |
| ·构建副猪嗜血杆菌GAPDH过表达菌株(GAO) | 第82-85页 |
| ·ELISPOT测定脾脏Ig分泌型细胞的数量 | 第85-86页 |
| ·感染试验 | 第86页 |
| ·细胞因子的测定 | 第86页 |
| ·小鼠巨噬细胞吞噬实验 | 第86页 |
| ·小鼠中性粒细胞介导的杀伤实验 | 第86-87页 |
| ·小鼠脾脏中免疫相关基因的表达 | 第87页 |
| ·统计分析 | 第87-88页 |
| ·结果与分析 | 第88-99页 |
| ·刺激B细胞和T细胞成熟外膜蛋白筛选与鉴定 | 第88-90页 |
| ·GAPDH蛋白能够促进淋巴细胞的增殖 | 第90页 |
| ·GAPDH蛋白介导的B细胞分化 | 第90-91页 |
| ·副猪嗜血杆菌GAPDH过表达菌株的构建 | 第91-93页 |
| ·GAPDH促进机体对副猪嗜血杆菌的清除 | 第93-95页 |
| ·副猪嗜血杆菌感染小鼠之后的组织切片观察 | 第95-96页 |
| ·副猪嗜血杆菌GAPDH蛋白诱导宿主IL-2的产生 | 第96-97页 |
| ·中性粒细胞介导的杀菌实验 | 第97-98页 |
| ·小鼠巨噬细胞介导的吞噬实验 | 第98页 |
| ·小鼠脾脏免疫相关基因的表达 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-103页 |
| ·促进B细胞和T细胞增值的GAPDH蛋白的筛选 | 第99-100页 |
| ·脾脏免疫相关基因的表达 | 第100-101页 |
| ·小鼠巨噬细胞感染模型的建立 | 第101页 |
| ·IL-2能够提高机体的免疫反应加速对病原菌的清除 | 第101-102页 |
| ·GAPDH蛋白免疫调节机制初步探讨 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| Publications | 第115-117页 |
| Curriculum vitae | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
