| 目录 | 第1-6页 |
| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| ·研究背景 | 第13-19页 |
| ·生物乙醇燃料研究的必要性 | 第13-14页 |
| ·木糖代谢途径改造的研究进展 | 第14-15页 |
| ·基因敲除技术 | 第15页 |
| ·DUP240家族 | 第15-18页 |
| ·基因芯片与荧光定量PCR技术 | 第18-19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19页 |
| ·研究技术路线 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·培养基及配制 | 第21页 |
| ·主要试剂盒及生化试剂 | 第21-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第23-24页 |
| ·菌株及质粒 | 第24-25页 |
| ·基因芯片分析 | 第25-26页 |
| ·酿酒酵母总RNA提取 | 第25页 |
| ·荧光定量PCR验证基因芯片分析结果 | 第25-26页 |
| ·敲除组件合成及转化 | 第26-29页 |
| ·敲除组件引物设计 | 第26页 |
| ·敲除组件的PCR合成 | 第26-27页 |
| ·敲除组件连接pGEM-T载体后测序 | 第27-28页 |
| ·敲除组件大量PCR及胶回收 | 第28-29页 |
| ·敲除组件转化 | 第29页 |
| ·鉴定敲除组件转化 | 第29-31页 |
| ·鉴定引物设计 | 第29-30页 |
| ·菌落PCR初步鉴定及提取基因组后PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·抗性标记去除 | 第31-33页 |
| ·转化pSH65质粒 | 第31-32页 |
| ·菌落PCR初步鉴定及提取质粒后PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·YPG诱导表达培养基诱导CRE基因表达及筛选 | 第33页 |
| ·菌落PCR初步鉴定及提取基因组后PCR鉴定 | 第33页 |
| ·生理生化测定 | 第33-34页 |
| ·生长速率测定 | 第33页 |
| ·CO2失重测定 | 第33-34页 |
| ·乙醇产量测定 | 第34页 |
| ·剩余葡萄糖含量测定 | 第34页 |
| ·剩余木糖含量测定 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR测定缺失CIT2基因菌株对木糖代谢基因调控 | 第34-37页 |
| ·酿酒酵母总RNA提取及反转录 | 第34-36页 |
| ·荧光定量PCR测定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| ·荧光定量PCR验证基因芯片分析结果 | 第37-40页 |
| ·酿酒酵母总RNA提取 | 第37页 |
| ·基因芯片分析的结果及验证 | 第37-40页 |
| ·敲除组件合成及转化结果 | 第40-42页 |
| ·敲除组件引物 | 第40页 |
| ·敲除组件的PCR电泳 | 第40页 |
| ·敲除组件连接pGEM-T载体测序结果 | 第40-41页 |
| ·敲除组件大量PCR及胶回收电泳 | 第41页 |
| ·敲除组件转化结果 | 第41-42页 |
| ·鉴定敲除组件转化结果 | 第42-43页 |
| ·鉴定引物 | 第42页 |
| ·菌落PCR初步鉴定及提取基因组后PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·抗性标记去除结果 | 第43-46页 |
| ·转化pSH65质粒结果 | 第43-44页 |
| ·菌落PCR初步鉴定及提质粒后PCR鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·YPG诱导表达培养基诱导CRE基因表达及筛选结果 | 第45页 |
| ·菌落PCR初步鉴定及提取基因组后PCR鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·生理生化测定结果 | 第46-50页 |
| ·生长速率结果 | 第46-47页 |
| ·CO2失重结果 | 第47页 |
| ·乙醇产量结果 | 第47-48页 |
| ·剩余葡萄糖含量结果 | 第48-49页 |
| ·剩余木糖含量结果 | 第49-50页 |
| ·荧光定量PCR测定缺失CIT2基因菌株对木糖代谢基因调控 | 第50-53页 |
| ·酿酒酵母总RNA的提取 | 第50-51页 |
| ·荧光定量PCR测定结果 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| ·基因芯片分析与CIT2基因敲除 | 第53-54页 |
| ·突变株生理生化与荧光定量分析 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
