酶催化不对称合成手性咖啡酸衍生物的研究
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| ·咖啡酸及衍生物研究进展 | 第13-16页 |
| ·咖啡酸酯类衍生物 | 第13-14页 |
| ·咖啡酸酰胺类衍生物 | 第14-16页 |
| ·咖啡酸衍生物合成方法 | 第16-19页 |
| ·手性咖啡酸衍生物 | 第19-20页 |
| ·酶催化合成 | 第20-21页 |
| ·脂肪酶 | 第21-23页 |
| ·脂肪酶催化活性 | 第21页 |
| ·脂肪酶对映选择性 | 第21-22页 |
| ·脂肪酶稳定性 | 第22页 |
| ·脂肪酶催化酯化反应 | 第22-23页 |
| ·脂肪酶催化酰化反应 | 第23页 |
| ·南极洲假丝酵母脂肪酶 B(CAL-B) | 第23-25页 |
| ·CAL-B 简介 | 第23-24页 |
| ·CAL-B 发展现状 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第25-26页 |
| ·本文研究思想 | 第26-28页 |
| 第二章 酶催化合成手性咖啡酸酯 | 第28-42页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·材料与仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-30页 |
| ·酶催化合成咖啡酸-2-戊酯 | 第29页 |
| ·产物构型的测定 | 第29-30页 |
| ·转化率的测定 | 第30页 |
| ·产物光学纯度和立体选择性比率的测定 | 第30页 |
| ·实验结果与讨论 | 第30-41页 |
| ·实验条件优化 | 第30-36页 |
| ·脂肪醇链长度对实验的影响 | 第36-37页 |
| ·热力学 | 第37-39页 |
| ·动力学研究 | 第39-40页 |
| ·固定化酶回收利用 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 响应曲面法优化咖啡酸-2-戊酯合成条件 | 第42-49页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料与方法 | 第42页 |
| ·实验设计 | 第42-43页 |
| ·统计学分析 | 第43-45页 |
| ·实验结果分析 | 第45-47页 |
| ·多因素对转化率的交互影响 | 第45-46页 |
| ·多因素对产物对映体选择性的影响 | 第46-47页 |
| ·最佳条件的筛选和确认 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第四章 酶促不对称合成手性咖啡酸酰胺 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料和方法 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-54页 |
| ·实验方法初探 | 第50页 |
| ·实验方法建立 | 第50-51页 |
| ·产物构型确定 | 第51页 |
| ·转化率的测定 | 第51-52页 |
| ·产物光学纯度和立体选择性比率的测定 | 第52页 |
| ·底物合成 | 第52-54页 |
| ·实验结果与讨论 | 第54-61页 |
| ·底物结构对酰化反应影响 | 第54-55页 |
| ·实验条件的优化 | 第55-58页 |
| ·热力学分析 | 第58-59页 |
| ·动力学研究 | 第59-61页 |
| ·固定化酶的可回复利用 | 第61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 第五章 CAL-B 在毕赤酵母中的表达 | 第63-79页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63-65页 |
| ·实验仪器 | 第63页 |
| ·实验试剂 | 第63-64页 |
| ·溶液配制 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-70页 |
| ·PA1K-pPIC9K 质粒的提取 | 第65-66页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第66页 |
| ·质粒线性化 | 第66-67页 |
| ·DNA 片段回收 | 第67页 |
| ·毕赤酵母 GS115 感受态的制作 | 第67-68页 |
| ·目的基因转化 GS115 感受态细胞 | 第68页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第68页 |
| ·玻璃珠法提取酵母基因组 | 第68页 |
| ·重组子的鉴定 | 第68-70页 |
| ·酶的表达与纯化 | 第70-72页 |
| ·酶的诱导表达 | 第70页 |
| ·蛋白测定方法 | 第70页 |
| ·酶活力测定方法 | 第70-71页 |
| ·酶的纯化 | 第71-72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-77页 |
| ·质粒提取鉴定 | 第72页 |
| ·质粒线性化和回收 | 第72-73页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第73-74页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第74-75页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第六章 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 附录一：1H NMR 核磁谱图 | 第86-93页 |
| 附录二：产物 HPLC 谱图 | 第93-97页 |
| 附录三： LC-MS 谱图 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 硕士期间发表文章 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
