| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·产气荚膜梭菌概述 | 第11页 |
| ·鸡坏死性肠炎 | 第11-12页 |
| ·鸡坏死性肠炎临床表现 | 第11页 |
| ·鸡坏死性肠炎亚临床表现 | 第11-12页 |
| ·鸡源产气荚膜梭菌主要致病因子 | 第12-14页 |
| ·ɑ毒素与鸡坏死性肠炎 | 第12-13页 |
| ·NetB 毒素与鸡坏死性肠炎 | 第13页 |
| ·β毒素与鸡坏死性肠炎 | 第13-14页 |
| ·产气荚膜梭菌保护性抗原 | 第14-16页 |
| ·ɑ毒素 | 第14页 |
| ·NetB 毒素 | 第14-15页 |
| ·其它重要保护性抗原 | 第15-16页 |
| ·免疫接种 | 第16-17页 |
| ·DNA 疫苗研究进展 | 第17-18页 |
| ·DNA 疫苗概述 | 第17页 |
| ·DNA 疫苗特点 | 第17-18页 |
| ·DNA 疫苗免疫接种 | 第18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·实验动物与细胞株 | 第19页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·分子生物学试剂与培养基 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·主要试剂配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-35页 |
| ·产气荚膜梭菌 EF-Tu 和 PFO 基因原核表达载体构建 | 第21-24页 |
| ·重组原核表达质粒鉴定 | 第24-25页 |
| ·原核表达质粒在大肠杆菌中诱导表达 | 第25-27页 |
| ·EF-Tu 和 PFO 多克隆抗体制备及生物活性检测 | 第27-28页 |
| ·PFO 和 EF-Tu 基因亚克隆及真核表达质粒构建 | 第28-30页 |
| ·重组真核表达质粒体外瞬时转染 | 第30-31页 |
| ·重组真核表达质粒大量制备及纯化 | 第31-32页 |
| ·重组真核表达质粒在鸡体内免疫效果检测 | 第32-34页 |
| ·数据统计 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-58页 |
| ·PCR 扩增 EF-Tu 和 PFO 基因 | 第35-36页 |
| ·重组原核表达质粒鉴定 | 第36-40页 |
| ·重组原核表达质粒 PCR 及双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组原核表达质粒序列鉴定 | 第37-40页 |
| ·重组蛋白原核表达及纯化 | 第40-42页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组质粒表达产物纯化 | 第41-42页 |
| ·原核表达蛋白复性及部分生物活性检测 | 第42-43页 |
| ·EF-Tu 和 PFO 蛋白多克隆抗体效价测定及生物活性检测 | 第43-46页 |
| ·EF-Tu 和 PFO 多克隆抗体效价测定 | 第43页 |
| ·EF-Tu 和 PFO 蛋白多克隆抗体生物活性检测 | 第43-46页 |
| ·EF-Tu 和 PFO 真核表达质粒构建及鉴定 | 第46-48页 |
| ·重组真核质粒体外瞬时表达检测 | 第48页 |
| ·重组真核质粒免疫保护反应 | 第48-58页 |
| ·重组真核质粒免疫后鸡体重变化 | 第48-51页 |
| ·产气荚膜梭菌在鸡小肠定植检测 | 第51页 |
| ·鸡产气荚膜梭菌特异性抗体检测 | 第51-56页 |
| ·重组真核质粒免疫攻菌后鸡肠道病理变化及免疫保护率 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| ·EF-Tu 与 PFO 原核重组质粒的构建及表达 | 第58-59页 |
| ·多克隆抗体制备及生物学活性 | 第59页 |
| ·EF-Tu 与 PFO 真核表达质粒构建 | 第59-60页 |
| ·真核表达质粒体外瞬时转染与检测 | 第60页 |
| ·重组真核表达质粒的免疫保护反应 | 第60-63页 |
| ·鸡产气荚膜梭菌特异性抗体变化 | 第61页 |
| ·重组真核表达质粒抗产气荚膜梭菌感染免疫效果 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
