| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-30页 |
| 1 大豆过氧化物酶的研究进展 | 第10-16页 |
| ·大豆过氧化物酶的结构特征 | 第10-13页 |
| ·SBP 的作用机制 | 第13-14页 |
| ·SBP 的应用 | 第14-16页 |
| ·SBP 的研究现状 | 第16页 |
| 2 蛋白酶的定向分子进化 | 第16-24页 |
| ·分子定向进化文库的构建 | 第17-20页 |
| ·分子定向进化文库的筛选 | 第20-22页 |
| ·分子定向进化的应用 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-30页 |
| 第二章 sbp 在 Pichia pasoris GS115 中的表达及表达条件的优化 | 第30-45页 |
| ·试剂与仪器 | 第30-32页 |
| ·试剂及工具酶 | 第30页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30-31页 |
| ·试剂配制 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·pPICZα -A-sbp 重组质粒的线性化反应 | 第32-33页 |
| ·pPICZα -A-sbp 重组质粒转化 Pichia pastoris GS115 | 第33-34页 |
| ·阳性 Pichia pastoris GS115 转化子的保存 | 第34页 |
| ·阳性 Pichia pastoris GS115 转化子的鉴定 | 第34-35页 |
| ·sbp 在 Pichia pastoris GS115 中的表达 | 第35页 |
| ·粗酶液的活性检测 | 第35页 |
| ·Pichia pastoris GS115 重组菌株表达 SBP 条件优化研究 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·pPICZα -A-sbp 重组质粒的线性化 | 第36-37页 |
| ·pPICZα -A-sbp 重组质粒转化 Pichia pastoris GS115 | 第37-38页 |
| ·阳性 Pichia pastoris GS115 转化子的 PCR 分析检测 | 第38-39页 |
| ·sbp 在 Pichia pastoris GS115 中的表达 | 第39-40页 |
| ·Pichia pastoris GS115 重组菌株表达 SBP 条件优化结果 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 第三章 大豆过氧化物酶基因随机突变文库的构建 | 第45-62页 |
| ·材料 | 第45-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·试剂及工具酶 | 第45页 |
| ·培养基及试剂的配制 | 第45-46页 |
| ·仪器 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-54页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·易错 PCR 条件的优化 | 第47-48页 |
| ·sbp 的易错 PCR | 第48-50页 |
| ·目的基因与 pPICZα -A 的双酶切 | 第50页 |
| ·目的基因与 pPICZα -A 的连接反应 | 第50-52页 |
| ·pPICZα -A-sbp 重组质粒转化 E.coli DH5α | 第52-53页 |
| ·E.coli DH5α阳性转化子中 pPICZα -A-sbp 重组质粒的鉴定 | 第53-54页 |
| ·sbp 随机突变文库的鉴定 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·易错 PCR 条件的优化 | 第54-55页 |
| ·sbp 的易错 PCR 反应 | 第55页 |
| ·目的基因与 pPICZα -A 的双酶切 | 第55-56页 |
| ·目的基因与 pPICZα -A 的连接反应 | 第56-57页 |
| ·pPICZα -A-sbp 重组质粒转化 E.coli DH5α | 第57页 |
| ·E.coli DH5α阳性转化子中 pPICZα -A-sbp 重组质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| ·随机突变文库的鉴定 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| 第四章 高催化活性大豆过氧化物酶突变菌株的筛选 | 第62-69页 |
| ·试剂与仪器 | 第62-64页 |
| ·试剂及工具酶 | 第62页 |
| ·菌株 | 第62页 |
| ·仪器 | 第62-63页 |
| ·试剂配制 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·突变文库转化 Pichia pastoris GS115 | 第64-65页 |
| ·筛选方法的初步建立 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-67页 |
| ·突变文库的线性化反应 | 第65-66页 |
| ·突变文库转化 Pichia pastoris GS115 | 第66页 |
| ·Pichia pastoris GS115 阳性转化子的鉴定 | 第66-67页 |
| ·高催化活性大豆过氧化物酶突变体的筛选 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 附录：硕士期间发表的论文及参与的科研项目 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
