| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 重金属镉污染土壤的生物修复 | 第15-21页 |
| ·重金属镉对农田的污染 | 第15页 |
| ·植物修复 | 第15-16页 |
| ·微生物修复 | 第16-17页 |
| ·微生物-植物联合修复 | 第17-20页 |
| ·菌根菌-植物联合修复 | 第18-19页 |
| ·根际细菌-植物联合修复 | 第19-20页 |
| ·木霉-植物联合修复 | 第20页 |
| ·耐受重金属 Cd 的微生物获得 | 第20-21页 |
| 2 真菌耐受重金属镉胁迫的机理 | 第21-27页 |
| ·胞外络合、沉淀 | 第21-22页 |
| ·细胞壁结合 | 第22-23页 |
| ·跨膜转运 | 第23-24页 |
| ·胞内脱毒 | 第24-25页 |
| ·隔离 | 第24-25页 |
| ·螯合 | 第25页 |
| ·抗氧化作用 | 第25-27页 |
| 3 展望 | 第27页 |
| 4 本研究的意义和主要研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 木霉菌 REMI 突变株构建与耐受 Cd 突变株筛选 | 第29-39页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| ·原生质体制备 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·分子检测 | 第30-31页 |
| ·突变株筛选 | 第31-33页 |
| ·初筛 | 第31-32页 |
| ·复筛 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-38页 |
| ·REMI 突变株构建 | 第33-35页 |
| ·突变株初筛 | 第35-36页 |
| ·复筛 | 第36-38页 |
| 3 结论与讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 木霉菌 REMI 突变株耐受 Cd 的生理生化分析 | 第39-51页 |
| 1 材料与方法 | 第39-43页 |
| ·Cd 对 P6 菌丝胁迫的氧化反应测定 | 第39-41页 |
| ·粗酶提取液制备 | 第39页 |
| ·MDA 检测 | 第39-40页 |
| ·O_2~-检测 | 第40页 |
| ·GSH 测定 | 第40页 |
| ·CAT 活性的测定 | 第40-41页 |
| ·SOD 活性的测定 | 第41页 |
| ·富集 Cd 亚细胞定位及吸附基团鉴定 | 第41-42页 |
| ·Cd 亚细胞定位的超微观察 | 第41-42页 |
| ·细胞吸附 Cd 的生化基团鉴定 | 第42页 |
| ·影响吸附 Cd~(2+)的因素分析 | 第42页 |
| ·统计分析 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-48页 |
| ·Cd 对木霉菌的氧化胁迫作用 | 第43页 |
| ·抗氧化胁迫作用 | 第43-45页 |
| ·富集 Cd 亚细胞定位及吸附基团鉴定 | 第45-47页 |
| ·突变株富集 Cd 亚细胞定位 | 第45页 |
| ·细胞壁吸附 Cd 的相关基团 | 第45-47页 |
| ·吸附动力学 | 第47页 |
| ·影响突变株吸附 Cd 的因素分析 | 第47-48页 |
| 3 结论与讨论 | 第48-51页 |
| ·突变株 P6 具有较强耐受 Cd 所致氧化胁迫能力 | 第48页 |
| ·明确了突变株 P6 菌丝吸附 Cd 位点 | 第48-49页 |
| ·环境 pH 是影响 P6 吸附 Cd 效率的关键因子 | 第49-51页 |
| 第四章 REMI 突变株插入位点侧翼基因克隆与序列分析 | 第51-65页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| ·质粒抢救 | 第51页 |
| ·tkpah 基因克隆 | 第51-52页 |
| ·生物信息学分析 | 第52页 |
| ·tkpah 表达特征 | 第52-53页 |
| ·tkpah 的 GFP 标记定位 | 第53-54页 |
| ·tkpah 基因拷贝数分析 | 第54页 |
| ·Tkpah 原核表达、纯化和酶活检测 | 第54-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-63页 |
| ·质粒抢救 | 第56-57页 |
| ·tkpah 基因克隆 | 第57-59页 |
| ·tkpah 推断氨基酸序列分析 | 第59-60页 |
| ·tkpah 系统进化树 | 第60页 |
| ·Tkpah 蛋白原核表达和纯化 | 第60-62页 |
| ·酶活检测 | 第62页 |
| ·tpah 基因表达分析 | 第62-63页 |
| ·tkpah 的 GFP 定位 | 第63页 |
| 3 结论与讨论 | 第63-65页 |
| ·成功构建了木霉菌 REMI 突变株质粒抢救技术体系 | 第63-64页 |
| ·tkpah 是细胞质 GVIIPLA2基因同源物 | 第64页 |
| ·tkpah 表达具有组织特异性 | 第64-65页 |
| 第五章 tkpah 基因功能分析 | 第65-73页 |
| 1 材料与方法 | 第65-67页 |
| ·tkpah 的构建 | 第65-67页 |
| ·敲除载体构建 | 第65页 |
| ·转化、筛选和验证 | 第65-66页 |
| ·敲除子菌落形态、生长分析 | 第66页 |
| ·敲除子重金属 Cd 和 H_2O_2的耐受力检测 | 第66页 |
| ·敲除子对重金属 Cd 的吸附 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-72页 |
| ·tkpah 构建 | 第67-68页 |
| ·敲除子菌落形态和生长分析 | 第68-69页 |
| ·敲除子对 Cd 和 H2O2胁迫的耐受性分析 | 第69-71页 |
| ·敲除子吸附 Cd 的特性 | 第71-72页 |
| 3 结论与讨论 | 第72-73页 |
| ·tkpah 可能以负调控方式控制木霉菌对 Cd 的耐受性 | 第72页 |
| ·木霉菌存在多重吸附 Cd 的机理 | 第72-73页 |
| 第六章 REMI 突变株应答 Cd 胁迫蛋白质组分析 | 第73-83页 |
| 1 材料与方法 | 第73-75页 |
| ·Cd 处理的 P6 菌丝蛋白样品制备 | 第73-74页 |
| ·双向电泳 | 第74-75页 |
| ·水化 | 第74页 |
| ·等电聚焦 | 第74页 |
| ·平衡 | 第74页 |
| ·二向电泳 | 第74-75页 |
| ·图像采集、质谱鉴定 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-79页 |
| ·Cd 胁迫下的 P6 菌丝体蛋白质组变化 | 第75-77页 |
| ·差异蛋白质谱鉴定 | 第77-79页 |
| 3 结论与讨论 | 第79-83页 |
| ·双向电泳是研究木霉菌耐 Cd 胁迫机理的有效手段 | 第79页 |
| ·Cd 胁迫可明显影响木霉 REMI 突变株抗逆相关蛋白表达 | 第79-83页 |
| 第七章 REMI 突变株对油菜富集 Cd 的影响 | 第83-89页 |
| 1 材料与方法 | 第83-85页 |
| ·土壤处理 | 第83-84页 |
| ·盆栽试验 | 第84页 |
| ·油菜生物量测定 | 第84页 |
| ·油菜组织内的 Cd 浓度测定 | 第84页 |
| ·数据分析 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-87页 |
| ·P6 对油菜生长和耐 Cd 的影响 | 第85-86页 |
| ·P6 促进油菜地上部组织富集 Cd | 第86-87页 |
| ·P6 增加了油菜对土壤 Cd 污染的净化率 | 第87页 |
| 3 结论与讨论 | 第87-89页 |
| ·木霉菌突变株提高了油菜富集 Cd 的能力 | 第87-88页 |
| ·土壤 Cd 浓度影响油菜对 Cd 的吸附效果 | 第88-89页 |
| 第八章 全文总结和后续研究展望 | 第89-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
