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梨小食心虫嗅觉相关蛋白基因的分子生物学特性及其原核表达研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
前言第13-15页
第一章 文献综述第15-32页
   ·昆虫触角感受器研究进展第15-18页
     ·触角感受器形态结构与感受机制第15页
     ·昆虫触角感器的类型及功能第15-18页
   ·昆虫气味结合蛋白的研究进展第18-22页
     ·气味结合蛋白的生化特性及分类第18页
     ·气味结合蛋白的表达第18-20页
     ·气味结合蛋白的作用机制和生理功能第20-22页
   ·昆虫化学感受蛋白的研究进展第22-25页
     ·化学感受蛋白的生化特征及分类第22页
     ·化学感受蛋白的表达第22-23页
     ·化学感受蛋白的功能第23-25页
   ·嗅觉受体的研究进展第25-27页
     ·昆虫嗅觉受体第26-27页
     ·昆虫特殊的受体蛋白 Or83b 及类似受体蛋白第27页
   ·电化学信号传导第27-30页
   ·选题依据、目的及意义第30-32页
第二章 梨小食心虫成虫行为节律研究第32-38页
   ·试验材料第32页
     ·供试昆虫第32页
   ·试验方法第32-33页
     ·成虫羽化行为观察第32页
     ·成虫交配行为观察第32页
     ·雌成虫产卵行为观察第32-33页
     ·数据处理第33页
   ·结果与分析第33-36页
     ·成虫羽化行为及其节律第33页
     ·成虫交配行为及其节律第33-35页
     ·雌成虫产卵行为及节律第35-36页
   ·讨论第36-38页
第三章 梨小食心虫触角感器的研究第38-46页
   ·试验材料第38页
     ·供试昆虫第38页
   ·试验方法第38页
   ·结果与分析第38-44页
     ·梨小食心虫触角的一般形态及感器种类第38-39页
     ·梨小食心虫触角感器的超微结构第39-44页
       ·毛形感器(Sensilla trichodea, Str)第39-40页
       ·锥形感器(Sensilla basiconica, Sba)第40页
       ·刺形感器(Sensilla chaetica, Sch)第40-41页
       ·栓锥形感器(Sensilla styloconica, Sst)第41-42页
       ·腔锥形感器(Sensilla coeloconica, Sco)第42页
       ·耳形感器(Sensilla auricillica, Sau)第42-43页
       ·B hm 氏鬃毛(B hm bristles, Bbr)第43-44页
   ·讨论第44-46页
第四章 梨小食心虫普通气味结合蛋白基因的克隆、序列分析及表达研究第46-73页
   ·试验材料第47-48页
     ·昆虫饲养与试验样本收集第47页
     ·主要试剂第47-48页
     ·主要仪器第48页
   ·试验方法第48-56页
     ·总 RNA 提取第48-49页
     ·总 RNA 质量检测第49页
     ·第一链 cDNA 的合成第49页
     ·引物设计第49-50页
     ·兼并 PCR 扩增梨小食心虫普通气味结合蛋白基因 cDNA 片段第50-51页
     ·RACE 扩增梨小食心虫普通气味结合蛋白基因 cDNA3′和 5′端序列第51页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因全长验证的 PCR 扩增第51-52页
     ·PCR 产物纯化、克隆与测序第52-54页
       ·PCR 产物纯化第52-53页
       ·连接反应第53页
       ·转化反应第53页
       ·质粒 DNA 提取第53-54页
       ·序列测定第54页
     ·序列分析第54页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因的组织分布第54-55页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因在光周期中表达特征分析第55-56页
       ·实时定量 PCR 反应第55页
       ·内参基因和目的基因 PCR 扩增效率的确定第55-56页
       ·数据处理第56页
   ·结果与分析第56-71页
     ·梨小食心虫成虫触角总 RNA 的提取第56页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因 cDNA 片段的克隆第56-59页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因全长 cDNA 序列的克隆与分析第59-66页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因的组织分布第66-67页
     ·实时定量 PCR 产物的熔解曲线分析第67-69页
     ·内参基因和目的基因 PCR 扩增效率分析第69-70页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因在光周期中表达特征分析第70-71页
   ·讨论第71-73页
第五章 梨小食心虫化学感受蛋白基因的克隆与序列分析第73-86页
   ·试验材料第74页
     ·供试昆虫第74页
     ·主要试剂第74页
     ·主要仪器第74页
   ·试验方法第74-77页
     ·总 RNA 的提取及第一链 cDNA 的合成第74页
     ·引物设计第74-75页
     ·兼并 PCR 扩增梨小食心虫化学感受蛋白基因 cDNA 片段第75-76页
     ·RACE 扩增梨小食心虫化学感受蛋白基因 cDNA3′和 5′端序列第76页
     ·梨小食心虫化学感受蛋白基因全长验证的 PCR 扩增第76-77页
     ·PCR 产物纯化、克隆与测序第77页
     ·序列分析第77页
     ·梨小食心虫化学感受蛋白基因的表达谱分析第77页
   ·结果与分析第77-84页
     ·梨小食心虫化学感受蛋白基因 cDNA 片段的克隆第77-79页
     ·梨小食心虫化学感受蛋白基因全长 cDNA 序列的克隆与分析第79-84页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白基因的组织分布第84页
   ·讨论第84-86页
第六章 梨小食心虫普通气味结合蛋白 2 和化学感受蛋白基因的原核表达第86-101页
   ·试验材料第86-87页
     ·供试昆虫第86页
     ·主要试剂第86-87页
     ·主要仪器第87页
   ·试验方法第87-91页
     ·引物设计与 PCR 扩增第87-88页
     ·融合表达载体的构建第88-89页
       ·重组克隆载体 pGEM-T/GmolGOBP2 和表达载体 pET-32a 的双酶切第88页
       ·重组克隆载体 pGEM-T/GmolCSP 和表达载体 pET-32a 的双酶切第88页
       ·目的片段与表达载体 pET-32a 片段的连接第88-89页
       ·连接产物的转化和验证第89页
     ·重组质粒 pET/GmolGOBP2 和 pET/GmolCSP 的诱导表达第89页
     ·表达产物的 SDS-PAGE 检测第89-91页
     ·Western 印迹检测第91页
     ·融合蛋白质的可溶性测定第91页
   ·结果与分析第91-100页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白 2 和化学感受蛋白基因的克隆第91-93页
     ·融合表达载体的构建第93-97页
     ·梨小食心虫普通气味结合蛋白 2 和化学感受蛋白基因在大肠杆菌中的表达第97-100页
   ·讨论第100-101页
全文总结第101-103页
参考文献第103-116页
致谢第116-117页
个人简介第117页

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