| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| ·BMPR-1B基因 | 第11-14页 |
| ·BMPR-1B基因的发现与生物学功能 | 第11-12页 |
| ·BMPR-1B基因的结构 | 第12页 |
| ·BMPR-1B基因的定位 | 第12页 |
| ·BMPR-1B基因的同源性 | 第12-13页 |
| ·BMPR-1B基因表达特性 | 第13页 |
| ·BMPR-1B的作用机制 | 第13-14页 |
| ·国内外的研究现状 | 第14-15页 |
| ·前景与展望 | 第15-16页 |
| ·论文研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 第2章 BMPR-1B基因的扩增与克隆及载体构建 | 第17-27页 |
| ·实验材料与设备 | 第17页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·实验药品及引物 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-22页 |
| ·溶液的配制 | 第18页 |
| ·从绵羊卵巢组织中提取RNA | 第18-19页 |
| ·反转录合成cDNA | 第19页 |
| ·绵羊BMPR-1B基因PCR扩增 | 第19页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第19-20页 |
| ·Plex质粒的制备与片段回收 | 第20-21页 |
| ·Plex、BMPR-1B双酶切 | 第21页 |
| ·热转化 | 第21页 |
| ·阳性克隆的筛选及PCR检测 | 第21-22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·总RNA的提取 | 第22页 |
| ·PCR扩增BMPR-1B基因 | 第22-23页 |
| ·Plex-BMPR-1B-HA酶切鉴定 | 第23页 |
| ·BMPR-1B基因序列比对结果 | 第23-25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| ·RNA的制备 | 第25-26页 |
| ·BMPR-1B基因的扩增 | 第26页 |
| ·BMPR-1B基因序列比对结果及分析 | 第26-27页 |
| 第3章 BMPR-1B基因在HEK293细胞中过表达及检测 | 第27-34页 |
| ·实验设备与材料 | 第27-28页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·实验药品 | 第27页 |
| ·主要仪器设备及溶液配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·Plex-BMPR-1B质粒的中提质粒 | 第28页 |
| ·Plex-BMPR-1B慢病毒的制备 | 第28-30页 |
| ·蛋白水平的检测 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-32页 |
| ·Plex-BMPR-1B及其包装质粒和包膜质粒的电泳图 | 第32页 |
| ·HEK293细胞中外源Plex-BMPR-1B-HA的表达 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·BMPR-1B基因的过表达 | 第32页 |
| ·中提质粒 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第33页 |
| ·产毒的注意事项 | 第33-34页 |
| 第4章 干扰分子的载体构建及产毒 | 第34-39页 |
| ·实验材料与设备 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·实验引物 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·shRNA分子经退火 | 第35页 |
| ·shRNA分子和pLL3.7质粒的双酶切 | 第35页 |
| ·连接 | 第35页 |
| ·热转化 | 第35页 |
| ·阳性克隆的筛选及PCR检测 | 第35页 |
| ·纯化重组质粒步骤 | 第35页 |
| ·shRNA慢病毒载体的构建 | 第35-36页 |
| ·连接 | 第35-36页 |
| ·Lv-BMPR-1B-shRNA慢病毒的制备 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-37页 |
| ·shRNA小分子退火后的检测 | 第36页 |
| ·PLL3.7双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·克隆的shRNA质粒比对结果 | 第37页 |
| ·病毒干扰RNA质粒PLL-BMPR-1B-shRNA-N的电泳图 | 第37页 |
| ·PLL-BMPR-1B-shRNA-N的包装及包膜质粒的电泳图 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·设计RNA干扰序列 | 第37-38页 |
| ·互补的双链 | 第38页 |
| ·RNA干扰的分子及机制 | 第38-39页 |
| 第5章 BMPR-lB-shRNAs干扰BMPR-1B细胞系检测 | 第39-44页 |
| ·实验材料与设备(略) | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·BMPR-1B细胞系的复苏 | 第39页 |
| ·干扰BMPR-1B细胞系 | 第39页 |
| ·制备cDNA | 第39-40页 |
| ·提取蛋白 | 第40页 |
| ·蛋白定量 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·荧光表达效果 | 第40-41页 |
| ·实时定量PCR | 第41-42页 |
| ·shRNA抑制效果在蛋白水平上的评价 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第6章 BMPR-1B-shRNAs感染卵泡颗粒细胞mRNA水平检测 | 第44-50页 |
| ·实验材料与设备 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验药品 | 第44页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第44页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·绵羊卵泡颗粒细胞的原代培养 | 第44-45页 |
| ·BMPR-1B-shRNAs感染绵羊卵泡颗粒细胞 | 第45页 |
| ·用Trizol法提取总RNA | 第45页 |
| ·反转录成cDNA | 第45页 |
| ·siRNA抑制效果在绵羊卵泡颗粒细胞上的评价 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·成熟的卵母细胞 | 第45-46页 |
| ·RNA电泳图 | 第46页 |
| ·卵泡颗粒细胞荧光图 | 第46-47页 |
| ·实时荧光定量图 | 第47-48页 |
| ·抑制效果图 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第7章 结论 | 第50-51页 |
| 附件 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
