| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·植物转录因子的研究现状 | 第12-14页 |
| ·转录因子特征的研究 | 第12页 |
| ·转录因子的表达调控的机理 | 第12-13页 |
| ·转录因子克隆方面的研究 | 第13-14页 |
| ·利用文库筛选法克隆转录因子 | 第13页 |
| ·利用PCR技术扩增转录因子 | 第13页 |
| ·利用转座子标签法与RNA差异显示法(DDRT-PCR)相结合的克隆转录因子 | 第13-14页 |
| ·酵母单杂交在转录因子克隆和鉴定中的应用 | 第14页 |
| ·参与类黄酮次生代谢的转录因子 | 第14页 |
| ·植物MYB转录因子的研究现状 | 第14-18页 |
| ·MYB转录因子的特征 | 第14-15页 |
| ·植物MYB转录因子功能 | 第15-17页 |
| ·参与对植物激素的应答 | 第15-16页 |
| ·控制植物细胞的形态和模式建成 | 第16页 |
| ·调控植物类黄酮的代谢 | 第16-17页 |
| ·MYB转录因子提高植物抗性的作用 | 第17页 |
| ·MYB转录因子研究现状 | 第17-18页 |
| ·果实特异启动子的研究现状 | 第18-19页 |
| ·2A11启动子研究现状 | 第18页 |
| ·研究启动子的意义 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导转化的原理 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导番茄的转化研究现状 | 第20页 |
| ·立体依据及其研究意义 | 第20-22页 |
| ·研究目标和研究内容 | 第22-23页 |
| ·研究目标 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·研究技术路线 | 第23-24页 |
| ·本论文的创新点 | 第24页 |
| 第二章 番茄果实特异型启动子FQE2A11和THM27转录因子的克隆 | 第24-48页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验试剂 | 第25页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·载体 | 第25页 |
| ·溶液 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·实验所用引物目录 表1 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·番茄中果实特异型启动子的克隆 | 第26-31页 |
| ·引言 | 第26-27页 |
| ·番茄基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·Nested-PCR扩增FQE2A11启动子序列 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·Nested-PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·FQE2A11启动子的连接、转化和酶切检测 | 第28-31页 |
| ·PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| ·启动子片段和克隆载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·FQE2A11启动子转化大肠杆菌 | 第29-30页 |
| ·SDS裂解法提取质粒 | 第30页 |
| ·酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·MYB转录因子THM27的克隆 | 第31-34页 |
| ·总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·Trizol法提取番茄总RNA | 第31-32页 |
| ·cDNA的合成 | 第32页 |
| ·THM27基因片段的Nested-PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32页 |
| ·Nested-PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·THM27基因的连接、转化和酶切检测 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收(同2.2.1.4.1) | 第33页 |
| ·THM27基因片段和克隆载体的连接 | 第33-34页 |
| ·THM27基因转化Top10(参考2.2.1.4.4) | 第34页 |
| ·SDS裂解法提取质粒(参考2.2.1.4.5) | 第34页 |
| ·菌液PCR鉴定和酶切双重鉴定 | 第34页 |
| ·THM27基因序列的分析 | 第34页 |
| ·启动子CMV35S和终止子NOS的克隆 | 第34-36页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·PCR扩增NOS终止子序列 | 第35页 |
| ·PCR扩增CMV35S启动子序列 | 第35-36页 |
| ·CMV35S和NOS PCR产物的回收(同2.2.1.4.1) | 第36页 |
| ·CMV35S和NOS回收产物的连接和转化(同2.2.1.4.4) | 第36页 |
| ·含有CMV35S和NOS基因的T质粒的提取(同2.2.1.4.5) | 第36页 |
| ·质粒PCR和酶切检测(同2.2.2.4.5),将检测为阳性的质粒送华大基因研究院测序鉴定 | 第36页 |
| ·结果分析 | 第36-48页 |
| ·FQE2A11启动子的克隆 | 第36-40页 |
| ·番茄基因组DNA提取分析 | 第36-37页 |
| ·Nested-PCR从基因组DNA中扩增FQE2A11启动子分析 | 第37-39页 |
| ·FQE2A11启动子的连接、转化和酶切检测的结果分析 | 第39-40页 |
| ·THM27基因的克隆及其序列分析 | 第40-46页 |
| ·番茄叶片总RNA提取的结果与分析 | 第40-41页 |
| ·Nested-PCR扩增THM27基因序列的分析 | 第41页 |
| ·菌液PCR和酶切双重鉴定重组菌 | 第41-43页 |
| ·THM27序列分析 | 第43-46页 |
| ·启动子CMV35S和终止子NOS的克隆结果和分析 | 第46-48页 |
| ·启动子CMV35S的克隆 | 第46-47页 |
| ·终止子NOS的克隆 | 第47-48页 |
| 第三章 MYB转录因子THM27植物表达载体的构建 | 第48-58页 |
| ·序言 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·质粒 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·引物合成和测序 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·利用重叠PCR技术进行基因连接及组合元件的克隆 | 第49-53页 |
| ·通过重叠PCR技术构建CMV35S-THM27-NOS组合元件 | 第49-53页 |
| ·重叠PCR技术构建THM27-NOS组合元件 | 第49-51页 |
| ·通过重叠PCR技术构建CMV35S-THM27-NOS组合元件 | 第51-53页 |
| ·CMV35S-THM27-NOS组合元件转化PMD18-T质粒 | 第53页 |
| ·表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·目的片断和表达载体的酶切 | 第54页 |
| ·酶切产物的回收 | 第54页 |
| ·表达载体和组合元件的连接 | 第54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54-55页 |
| ·质粒的提取(参考2.2.1.4.5) | 第55页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1302-CMV35S-THM27-NOS的PCR鉴定 | 第55页 |
| ·结果分析 | 第55-58页 |
| ·THM27-NOS组合元件的分析 | 第55页 |
| ·CMV35S-THM27-NOS组合元件的构建 | 第55-57页 |
| ·表达载体的构建和检测 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58页 |
| 第四章 农杆菌介导THM27基因转化番茄的研究 | 第58-67页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·实验材料和菌株 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-63页 |
| ·农杆菌菌株感受态细胞的制备 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1302-CMV35S-THM27-NOS电击法转化根癌农杆菌 | 第60页 |
| ·菌液的PCR鉴定 | 第60-61页 |
| ·番茄转THM27基因转化番茄体系的建立 | 第61-62页 |
| ·含有重组质粒的农杆菌的培养和活化 | 第61页 |
| ·外植体的准备 | 第61页 |
| ·农杆菌EH105转化番茄 | 第61-62页 |
| ·阳性转化番茄植株的PCR检测 | 第62-63页 |
| ·基因组PCR检测 | 第62页 |
| ·RT-PCR检测 | 第62-63页 |
| ·结果分析 | 第63-66页 |
| ·转化农杆菌的鉴定 | 第63页 |
| ·转基因番茄的遗传转化体系建立 | 第63-64页 |
| ·转基因植株的检测 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·后续实验 | 第67页 |
| 第五章 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附表 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
