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CDK2AP1,SMARCE1及PGCs在鸡胚性腺发育中的作用研究

中文摘要第1-12页
ABSTRACT第12-15页
縮略词表第15-17页
第一章 文献综述第17-31页
 1 引言第17页
 2 鸟类性别决定与性腺发育机制的研究进展第17-26页
   ·鸡的Z和W染色体第18-19页
   ·Dmrt1在Z染色体上的剂量效应第19-21页
   ·W染色体上携带显性的卵巢决定因子第21-22页
   ·鸡性腺分化相关基因研究进展第22-25页
   ·鸟类体细胞的性别是细胞自主决定的第25-26页
 3 功能基因组学研究方法及其在性腺发育研究中的应用第26-27页
 4 WISH研究方法及其在性腺发育研究中的应用第27-28页
 5 利用PGCs的嵌合体鸡研究第28-29页
   ·PGCs的起源及检测方法第28-29页
   ·获得种系嵌合体鸡胚的方法第29页
   ·白消安在生产种系嵌合体鸡胚中的研究进展第29页
 6 本研究的目的和意义第29-31页
第二章 雌雄鸡胚Cdk2ap1的时空表达第31-55页
 1 前言第31-32页
 2 材料与方法第32-42页
   ·试验材料第32-35页
     ·试验样品第32页
     ·主要仪器和设备第32页
     ·主要药品及试剂第32-33页
     ·缓冲液和常用试剂的配制第33-35页
   ·试验方法第35-42页
     ·胚胎组织DNA提取及胚胎性别鉴定第35-36页
       ·胚胎组织DNA抽提第35-36页
       ·胚胎性别鉴定第36页
     ·胚胎性腺总RNA抽提及反转录第36-37页
     ·用于WISH的探针制备及标记效率的检测第37-39页
       ·用于合成探针的模板制备第37-39页
       ·正反义RNA探针的合成及标记效率的检测第39页
     ·WISH第39-40页
       ·鸡胚的收集第39-40页
       ·WISH第40页
     ·半定量RT-PCR检测Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达第40-41页
     ·IHC检测Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达第41-42页
       ·切片处理与制作第41页
       ·染色第41-42页
       ·IHC信号分析第42页
 3 结果第42-50页
   ·胚胎组织DNA提取及性别鉴定第42-43页
   ·胚胎性腺总RNA抽提及反转录第43页
   ·Cdk2ap1片段探针的制备及标记效率的检测第43-45页
     ·探针模板的制备第43-44页
     ·点杂交检测正义探针和反义探针的标记效率第44-45页
   ·WISH条件的优化第45页
   ·Cdk2ap1在4.0 d的表达第45-47页
   ·Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达第47-50页
     ·性腺RT-PCR检测第47-48页
     ·Cdk2ap1基因在雌雄泌尿生殖系统表达第48-49页
     ·CDK2AP1在性腺和中肾的表达第49-50页
 4 讨论第50-55页
   ·Cdk2ap1在4.0 d的表达第50-51页
   ·Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达第51-52页
   ·WISH条件的优化第52-53页
   ·小结第53-55页
第三章 鸡胚中Smarce1超表达验证及超表达前后性腺发育特征变化研究第55-68页
 1 前言第55-56页
 2 材料与方法第56-59页
   ·试验材料第56-57页
     ·试验样品第56页
     ·主要仪器和设备第56页
     ·主要药品及试剂第56页
     ·缓冲液和常用试剂的配制第56-57页
     ·载玻片与盖玻片处理第57页
   ·试验方法第57-59页
     ·胚胎组织DNA提取及胚胎性别鉴定第57页
       ·胚胎组织DNA抽提法第57页
       ·胚胎性别鉴定第57页
     ·胚胎性腺总RNA抽提及反转录第57页
     ·用于WISH的探针制备及标记效率的检测第57-58页
       ·用于合成探针的模板制备第57-58页
       ·正反义RNA探针的合成及标记效率的检测第58页
     ·对照鸡胚及Smarce1超表达后鸡胚性腺的WISH第58页
       ·鸡胚的收集及性别鉴定第58页
       ·WISH第58页
     ·鸡胚性腺的IHC染色和HE染色第58-59页
       ·样品的采集与处理,石蜡切片的制作及HE染色第58页
       ·IHC染色第58-59页
 3 结果第59-66页
   ·Smarce1片段探针的制备及标记效率的检测第59-60页
     ·探针模板的制备第59-60页
     ·点杂交检测正义探针和反义探针的标记效率第60页
   ·鸡胚性腺的WISH第60-62页
   ·鸡胚性腺的IHC染色第62-64页
   ·鸡胚性腺的HE染色第64-66页
 4 讨论第66-67页
   ·Smarce1的表达第66页
   ·Smarce1的功能第66-67页
 5 小结第67-68页
第四章 白消安对鸡胚睾丸和卵巢中PGCs的不同影响第68-79页
 1 前言第68页
 2 材料与方法第68-71页
   ·试验材料第68-69页
     ·试验样品第68-69页
     ·主要仪器和设备第69页
     ·主要药品及试剂第69页
     ·缓冲液和常用试剂的配制第69页
     ·载玻片与盖玻片处理第69页
   ·试验方法第69-71页
     ·鸡胚的孵化及处理第69页
     ·鸡胚的收集,DNA的提取及性别鉴定第69-70页
       ·组织中DNA抽提具体操作步骤第70页
       ·性别鉴定第70页
     ·不同剂量不同时期鸡胚的成活率第70页
     ·PGCs的IHC检测第70页
     ·不同剂量处理下PGCs的统计分析第70页
     ·石蜡切片制作及HE染色检测性腺形态第70-71页
 3 结果第71-77页
   ·不同剂量处理后鸡胚成活率第71页
   ·PGCs在性腺中的分布和分化特点第71-72页
   ·PGCs在性腺中的变化规律第72-73页
   ·性腺结构和形态的变化第73-77页
 4 讨论第77-79页
   ·PGCs在雌雄性腺中的分布特点及可能的原因第77页
   ·雌雄性腺中PGCs对白消安的不同反应第77-78页
   ·白消安对性腺形态的影响第78页
   ·小结第78-79页
结论第79-81页
特色与创新之处第81-82页
需进一步研究的工作第82-83页
参考文献第83-94页
附录1 研究生期间所做的其它工作第94-95页
附录2 在读期间发表论文题录第95-96页
致谢第96页

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