中文摘要 | 第1-12页 |
ABSTRACT | 第12-15页 |
縮略词表 | 第15-17页 |
第一章 文献综述 | 第17-31页 |
1 引言 | 第17页 |
2 鸟类性别决定与性腺发育机制的研究进展 | 第17-26页 |
·鸡的Z和W染色体 | 第18-19页 |
·Dmrt1在Z染色体上的剂量效应 | 第19-21页 |
·W染色体上携带显性的卵巢决定因子 | 第21-22页 |
·鸡性腺分化相关基因研究进展 | 第22-25页 |
·鸟类体细胞的性别是细胞自主决定的 | 第25-26页 |
3 功能基因组学研究方法及其在性腺发育研究中的应用 | 第26-27页 |
4 WISH研究方法及其在性腺发育研究中的应用 | 第27-28页 |
5 利用PGCs的嵌合体鸡研究 | 第28-29页 |
·PGCs的起源及检测方法 | 第28-29页 |
·获得种系嵌合体鸡胚的方法 | 第29页 |
·白消安在生产种系嵌合体鸡胚中的研究进展 | 第29页 |
6 本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
第二章 雌雄鸡胚Cdk2ap1的时空表达 | 第31-55页 |
1 前言 | 第31-32页 |
2 材料与方法 | 第32-42页 |
·试验材料 | 第32-35页 |
·试验样品 | 第32页 |
·主要仪器和设备 | 第32页 |
·主要药品及试剂 | 第32-33页 |
·缓冲液和常用试剂的配制 | 第33-35页 |
·试验方法 | 第35-42页 |
·胚胎组织DNA提取及胚胎性别鉴定 | 第35-36页 |
·胚胎组织DNA抽提 | 第35-36页 |
·胚胎性别鉴定 | 第36页 |
·胚胎性腺总RNA抽提及反转录 | 第36-37页 |
·用于WISH的探针制备及标记效率的检测 | 第37-39页 |
·用于合成探针的模板制备 | 第37-39页 |
·正反义RNA探针的合成及标记效率的检测 | 第39页 |
·WISH | 第39-40页 |
·鸡胚的收集 | 第39-40页 |
·WISH | 第40页 |
·半定量RT-PCR检测Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达 | 第40-41页 |
·IHC检测Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达 | 第41-42页 |
·切片处理与制作 | 第41页 |
·染色 | 第41-42页 |
·IHC信号分析 | 第42页 |
3 结果 | 第42-50页 |
·胚胎组织DNA提取及性别鉴定 | 第42-43页 |
·胚胎性腺总RNA抽提及反转录 | 第43页 |
·Cdk2ap1片段探针的制备及标记效率的检测 | 第43-45页 |
·探针模板的制备 | 第43-44页 |
·点杂交检测正义探针和反义探针的标记效率 | 第44-45页 |
·WISH条件的优化 | 第45页 |
·Cdk2ap1在4.0 d的表达 | 第45-47页 |
·Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达 | 第47-50页 |
·性腺RT-PCR检测 | 第47-48页 |
·Cdk2ap1基因在雌雄泌尿生殖系统表达 | 第48-49页 |
·CDK2AP1在性腺和中肾的表达 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-55页 |
·Cdk2ap1在4.0 d的表达 | 第50-51页 |
·Cdk2ap1在不同时期鸡胚中的表达 | 第51-52页 |
·WISH条件的优化 | 第52-53页 |
·小结 | 第53-55页 |
第三章 鸡胚中Smarce1超表达验证及超表达前后性腺发育特征变化研究 | 第55-68页 |
1 前言 | 第55-56页 |
2 材料与方法 | 第56-59页 |
·试验材料 | 第56-57页 |
·试验样品 | 第56页 |
·主要仪器和设备 | 第56页 |
·主要药品及试剂 | 第56页 |
·缓冲液和常用试剂的配制 | 第56-57页 |
·载玻片与盖玻片处理 | 第57页 |
·试验方法 | 第57-59页 |
·胚胎组织DNA提取及胚胎性别鉴定 | 第57页 |
·胚胎组织DNA抽提法 | 第57页 |
·胚胎性别鉴定 | 第57页 |
·胚胎性腺总RNA抽提及反转录 | 第57页 |
·用于WISH的探针制备及标记效率的检测 | 第57-58页 |
·用于合成探针的模板制备 | 第57-58页 |
·正反义RNA探针的合成及标记效率的检测 | 第58页 |
·对照鸡胚及Smarce1超表达后鸡胚性腺的WISH | 第58页 |
·鸡胚的收集及性别鉴定 | 第58页 |
·WISH | 第58页 |
·鸡胚性腺的IHC染色和HE染色 | 第58-59页 |
·样品的采集与处理,石蜡切片的制作及HE染色 | 第58页 |
·IHC染色 | 第58-59页 |
3 结果 | 第59-66页 |
·Smarce1片段探针的制备及标记效率的检测 | 第59-60页 |
·探针模板的制备 | 第59-60页 |
·点杂交检测正义探针和反义探针的标记效率 | 第60页 |
·鸡胚性腺的WISH | 第60-62页 |
·鸡胚性腺的IHC染色 | 第62-64页 |
·鸡胚性腺的HE染色 | 第64-66页 |
4 讨论 | 第66-67页 |
·Smarce1的表达 | 第66页 |
·Smarce1的功能 | 第66-67页 |
5 小结 | 第67-68页 |
第四章 白消安对鸡胚睾丸和卵巢中PGCs的不同影响 | 第68-79页 |
1 前言 | 第68页 |
2 材料与方法 | 第68-71页 |
·试验材料 | 第68-69页 |
·试验样品 | 第68-69页 |
·主要仪器和设备 | 第69页 |
·主要药品及试剂 | 第69页 |
·缓冲液和常用试剂的配制 | 第69页 |
·载玻片与盖玻片处理 | 第69页 |
·试验方法 | 第69-71页 |
·鸡胚的孵化及处理 | 第69页 |
·鸡胚的收集,DNA的提取及性别鉴定 | 第69-70页 |
·组织中DNA抽提具体操作步骤 | 第70页 |
·性别鉴定 | 第70页 |
·不同剂量不同时期鸡胚的成活率 | 第70页 |
·PGCs的IHC检测 | 第70页 |
·不同剂量处理下PGCs的统计分析 | 第70页 |
·石蜡切片制作及HE染色检测性腺形态 | 第70-71页 |
3 结果 | 第71-77页 |
·不同剂量处理后鸡胚成活率 | 第71页 |
·PGCs在性腺中的分布和分化特点 | 第71-72页 |
·PGCs在性腺中的变化规律 | 第72-73页 |
·性腺结构和形态的变化 | 第73-77页 |
4 讨论 | 第77-79页 |
·PGCs在雌雄性腺中的分布特点及可能的原因 | 第77页 |
·雌雄性腺中PGCs对白消安的不同反应 | 第77-78页 |
·白消安对性腺形态的影响 | 第78页 |
·小结 | 第78-79页 |
结论 | 第79-81页 |
特色与创新之处 | 第81-82页 |
需进一步研究的工作 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-94页 |
附录1 研究生期间所做的其它工作 | 第94-95页 |
附录2 在读期间发表论文题录 | 第95-96页 |
致谢 | 第96页 |