| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-35页 |
| 1 研究背景 | 第16-17页 |
| 2 文献综述 | 第17-35页 |
| ·非生物逆境和生物逆境 | 第17页 |
| ·非生物逆境对植物的伤害 | 第17-19页 |
| ·非生物逆境对水分代谢的影响 | 第18页 |
| ·非生物逆境对光合作用的影响 | 第18-19页 |
| ·非生物逆境对呼吸作用的影响 | 第19页 |
| ·非生物逆境对物质代谢的影响 | 第19页 |
| ·活性氧的伤害 | 第19页 |
| ·植物对非生物逆境的适应 | 第19-22页 |
| ·植物形态结构适应 | 第20页 |
| ·植物生理适应 | 第20页 |
| ·植物酶保护系统 | 第20-21页 |
| ·植物体内渗透调节物质的变化 | 第21-22页 |
| ·非生物逆境蛋白的表达 | 第22页 |
| ·植物对逆境胁迫的应答 | 第22-28页 |
| ·非生物逆境信号分子 | 第24-26页 |
| ·非生物胁迫应答基因 | 第26-28页 |
| ·ABF与植物抗旱的关系 | 第28-30页 |
| ·MAPK与植物抗旱的关系 | 第30-31页 |
| ·bHLH与植物抗寒的关系 | 第31-32页 |
| ·ICE1与植物抗寒的关系 | 第32-35页 |
| 第二章 枳PtrABF基因的分离、克隆及功能研究 | 第35-60页 |
| 1 引言 | 第35-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-44页 |
| ·植物材料和逆境处理 | 第36页 |
| ·PtrABF基因克隆及表达分析 | 第36-37页 |
| ·基因表达分析(Real-time-PCR) | 第37-38页 |
| ·PtrABF基因亚细胞定位 | 第38页 |
| ·PtrABF转录激活及转录结合分析 | 第38-39页 |
| ·植物转化载体构建 | 第39-40页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第40-41页 |
| ·转化植株的分子及生理鉴定 | 第41-43页 |
| ·烟草叶片DNA提取 | 第42页 |
| ·阳性转基因植株PCR检测 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的超表达分析 | 第43页 |
| ·电导率及叶绿素测定 | 第43-44页 |
| ·过氧化氢(H_2O_2)和超氧阴离子(O_2~-)的测定 | 第44页 |
| ·抗氧化酶活力的测定 | 第44页 |
| ·统计分析 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-57页 |
| ·PtrABF的克隆及生物信息学分析 | 第44-47页 |
| ·PtrABF对非生物逆境的响应模式 | 第47-48页 |
| ·PtrABF亚细胞定位 | 第48-49页 |
| ·PtrABF转录激活及与ABRE转录结合分析 | 第49-51页 |
| ·PtrABF能够增强植物抗脱水及抗干旱能力 | 第51-53页 |
| ·转基因植株和未转化植株活性氧检测 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草及野生型干旱前后抗氧化酶活性及编码基因表达分析 | 第54-56页 |
| ·干旱前后逆境相关基因的表达分析 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 第三章 枳PtrMAPK基因的分离、克隆及功能鉴定 | 第60-87页 |
| 1 引言 | 第60-61页 |
| 2 材料和方法 | 第61-68页 |
| ·植物材料及逆境处理 | 第61页 |
| ·PtrMAPK的克隆及生物信息学分析 | 第61-62页 |
| ·PtrMAPK的亚细胞定位 | 第62-63页 |
| ·蛋白激酶的活性分析 | 第63页 |
| ·植物转化载体构建 | 第63-64页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第64-65页 |
| ·阳性转基因烟草初步确定 | 第65页 |
| ·转化植株的分子及生理鉴定 | 第65-67页 |
| ·烟草叶片DNA提取 | 第65页 |
| ·阳性转基因植株PCR检测 | 第65-66页 |
| ·转基因植株的超表达分析 | 第66-67页 |
| ·转基因烟草和野生型烟草的抗性分析 | 第67页 |
| ·电导率、叶绿素含量、超氧阴离子(O_2~-)、过氧化氢(H_2O_2)、丙二醛含量、抗氧化酶活性及代谢水平的分析 | 第67-68页 |
| ·细胞死亡及相对含水量的测定 | 第68页 |
| ·实时定量进行表达分析 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-83页 |
| ·PtrMAPK全长cDNA克隆及序列分析 | 第68-71页 |
| ·PtrMAPK逆境下的表达模式 | 第71-72页 |
| ·PtrMAPK亚细胞定位 | 第72-73页 |
| ·PtrMAPK蛋白激酶活性分析 | 第73-74页 |
| ·PtrMAPK烟草的遗传转化及再生 | 第74页 |
| ·PtrMAPK转基因烟草抗性鉴定 | 第74-77页 |
| ·相对含水量及细胞死亡测定 | 第77-78页 |
| ·组织化学染色分析H_2O_2和O_2~-积累 | 第78-79页 |
| ·抗氧化酶活性及代谢物含量分析 | 第79-80页 |
| ·SOD及POD抑制剂能减弱转基因系的抗性 | 第80-82页 |
| ·活性氧及逆境相关基因在WT及转基因系干旱处理前后的表达分析 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| 第四章 枳PtrbHLH基因的分离、克隆及功能鉴定 | 第87-125页 |
| 1 引言 | 第87-88页 |
| 2 材料和方法 | 第88-97页 |
| ·植物材料和逆境处理 | 第88页 |
| ·PtrbHLH基因克隆及生物信息学分析 | 第88-89页 |
| ·定量分析基因的表达模式 | 第89页 |
| ·PtrbHLH基因亚细胞定位、转录激活及转录结合分析 | 第89-90页 |
| ·植物转化超表达载体构建 | 第90-91页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第91页 |
| ·RNAi-PtrbHLH抑制表达载体构建 | 第91-92页 |
| ·柠檬遗传转化 | 第92-93页 |
| ·实验材料准备 | 第92页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第92-93页 |
| ·外植体准备 | 第93页 |
| ·侵染与共培养 | 第93页 |
| ·筛选培养与再生 | 第93页 |
| ·转化植株分子及生理鉴定 | 第93-94页 |
| ·烟草叶片及柠檬DNA提取 | 第93页 |
| ·阳性转基因植株PCR检测 | 第93-94页 |
| ·半定量PCR检测PtrbHLH基因的超表达 | 第94-95页 |
| ·电导率及脯胺酸测定 | 第95-96页 |
| ·细胞死亡染色 | 第96页 |
| ·统计分析 | 第96页 |
| ·POD抑制剂(叠氮化钠,NaN_3)处理 | 第96页 |
| ·芯片杂交及数据分析 | 第96-97页 |
| ·芯片中差异基因功能注释 | 第97页 |
| ·Real-time-PCR验证芯片结果 | 第97页 |
| 3 结果与分析 | 第97-120页 |
| ·PtrbHLH克隆及生物信息学分析 | 第97-99页 |
| ·PtrbHLH各种不同逆境下的响应模式 | 第99-100页 |
| ·PtrbHLH亚细胞定位 | 第100-101页 |
| ·PtrbHLH转录激活及转录结合分析 | 第101-102页 |
| ·PtrbHLH转基因烟草超表达分析 | 第102-103页 |
| ·PtrbHLH转基因烟草的超表达能够增强其抗寒能力 | 第103-107页 |
| ·PtrbHLH转基因柠檬的转化及抗性分析 | 第107-109页 |
| ·基因芯片挑选的差异基因 | 第109-110页 |
| ·差异基因功能注释和分类 | 第110-111页 |
| ·差异基因中上调的氧化酶 | 第111-112页 |
| ·挑选的候选基因在处理前后的表达 | 第112-114页 |
| ·PtrbHLH调节转基因柠檬的ROS清除能力 | 第114-116页 |
| ·PtrbHLH调节转基因烟草的ROS清除能力 | 第116-119页 |
| ·PtrbHLH同E-box的转录结合分析 | 第119-120页 |
| 4 讨论 | 第120-124页 |
| 5 结论 | 第124-125页 |
| 第五章 枳PtrICE基因的分离、克隆及功能研究 | 第125-152页 |
| 1 引言 | 第125-126页 |
| 2 材料和方法 | 第126-137页 |
| ·PtrICE1的克隆和生物信息学分析 | 第126-127页 |
| ·定量分析基因的表达模式 | 第127页 |
| ·PtrICE1基因亚细胞定位和转录激活分析 | 第127-128页 |
| ·PtrICE转录激活及与MYC的转录结合 | 第128页 |
| ·植物转化载体构建 | 第128-130页 |
| ·转基因烟草的抗性分析 | 第130页 |
| ·枳cDNA文库的构建 | 第130-136页 |
| ·总RNA的提取 | 第130页 |
| ·mRNA分离 | 第130-131页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第131-132页 |
| ·第二链cDNA的合成 | 第132-133页 |
| ·连接attB1接头于双链cDNA | 第133页 |
| ·双链cDNA过柱纯化 | 第133-134页 |
| ·BP重组反应 | 第134-135页 |
| ·转化ElectroMAX~(TM) DH10B~(TM) | 第135页 |
| ·对cDNA文库的库容量进行分析 | 第135页 |
| ·对cDNA文库进行LR重组反应 | 第135-136页 |
| ·pDESTTM32透饵载体的构建 | 第136页 |
| ·RNAi-PtrICE1抑制表达载体构建 | 第136-137页 |
| 3 结论 | 第137-149页 |
| ·PtrICE1的克隆及生物信息学分析 | 第137-140页 |
| ·PtrICE1在不同逆境下的时空表达模式 | 第140页 |
| ·PtrICE1亚细胞定位 | 第140-141页 |
| ·PtrICE1的转录激活活性分析 | 第141-143页 |
| ·PtrICE1酵母双杂文库构建 | 第143-145页 |
| ·RNA提取 | 第143页 |
| ·双杂文库库容量检测 | 第143页 |
| ·酵母双杂文库质量检测 | 第143-144页 |
| ·PtrICE1酵母双杂文库的筛选 | 第144-145页 |
| ·PtrICE1转基因烟草的转化过程及获得 | 第145-146页 |
| ·PtrICE1转基因烟草和PCR鉴定及超表达分析 | 第146页 |
| ·PtrICE1的超表达增强植物抗寒能力 | 第146-148页 |
| ·PtrICE1抑制表达转基因植株表型分析 | 第148-149页 |
| 4 讨论 | 第149-151页 |
| 5 结论 | 第151-152页 |
| 参考文献 | 第152-167页 |
| 附表 | 第167-211页 |
| 附录 | 第211-212页 |
| 致谢 | 第212页 |
