| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-16页 |
| 第一部分 真核翻译起始因子eIF-5A的结构与功能研究以及Hypusine化相关蛋白的结构功能研究 | 第16-80页 |
| 第一章 研究背景 | 第16-38页 |
| ·引言 | 第16-19页 |
| ·eIF-5A蛋白质的功能和研究现状 | 第19-25页 |
| ·eIF-5A的简介 | 第19页 |
| ·eIF-5A的发现和基本特性 | 第19-21页 |
| ·eIF-5A的功能研究进展 | 第21-24页 |
| ·eIF-5A的三维结构研究 | 第24-25页 |
| ·拟南芥和酿酒酵母中的eIF-5A同源蛋白质 | 第25-26页 |
| ·拟南芥中eIF-5A的同源蛋白质 | 第25页 |
| ·酿酒酵母中eIF-5A的同源蛋白质 | 第25-26页 |
| ·Hypusine化修饰相关蛋白质的介绍以及修饰过程概述 | 第26-34页 |
| ·Hypusine简介 | 第26页 |
| ·Hypusine的发现历史 | 第26-27页 |
| ·DHS催化的第一步反应步骤 | 第27-29页 |
| ·Hypusine化修饰相关蛋白质的介绍 | 第29-32页 |
| ·Hypusine化相关的三种蛋白质在进化上的保守性 | 第32-34页 |
| ·eIF-5A和DHS的相互作用研究 | 第34-35页 |
| ·eIF-5A与DHS和DOHH都有相互作用 | 第34页 |
| ·eIF-5A与DHS的相互作用情况 | 第34-35页 |
| ·本课题的研究目标和内容 | 第35-38页 |
| 第二章 实验材料,设备与方法 | 第38-46页 |
| ·实验材料与设备 | 第38-39页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第38页 |
| ·实验试剂与酶 | 第38-39页 |
| ·实验仪器设备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-46页 |
| ·目的基因的重组克隆质粒构建 | 第39-42页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白质的晶体生长 | 第43-44页 |
| ·晶体结构解析方法 | 第44-46页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第46-78页 |
| ·AteIF-5A2的表达与纯化 | 第46-49页 |
| ·AteIF-5A2的引物设计 | 第46页 |
| ·AteIF-5A2的质粒构建 | 第46-47页 |
| ·AteIF-5A2蛋白的表达 | 第47-48页 |
| ·AteIF-5A2蛋白的纯化和浓缩 | 第48-49页 |
| ·AteIF-5A2蛋白的初步晶体学研究 | 第49-50页 |
| ·AteIF-5A2蛋白晶体的生长与优化 | 第49页 |
| ·AteIF-5A2蛋白衍射数据的收集与处理 | 第49-50页 |
| ·晶体结构的解析与数据质量分析 | 第50-54页 |
| ·晶体结构解析 | 第50-51页 |
| ·晶体质量的评估 | 第51-54页 |
| ·AteIF-5A2的晶体结构描述 | 第54-57页 |
| ·AteIF-5A2的二聚体作用界面及猜想 | 第57-61页 |
| ·AteIF-5A2的二聚体作用界面 | 第57-59页 |
| ·植物中eIF-5A可能的二聚体形式 | 第59-61页 |
| ·AteIF-5A2的核酸结合能力 | 第61-63页 |
| ·酿酒酵母中Hypusine化相关蛋白质的表达纯化和结晶 | 第63-66页 |
| ·Hyp2,Anb1,Dys1和Lia1的质粒构建 | 第63页 |
| ·Hyp2,Anb1,Lia1的蛋白质表达,纯化和结晶 | 第63-65页 |
| ·Dys1蛋白的表达和纯化 | 第65-66页 |
| ·Dys1蛋白的衍射数据收集与处理 | 第66-67页 |
| ·Dys1蛋白晶体结构的解析和数据质量分析 | 第67-69页 |
| ·Dys1蛋白的晶体结构解析 | 第67-68页 |
| ·Dys1蛋白晶体结构质量的评估 | 第68-69页 |
| ·Dys1蛋白的晶体结构 | 第69-73页 |
| ·Dys1蛋白的整体三维结构 | 第69-71页 |
| ·NAD结合区域以及活性通道的结构 | 第71-73页 |
| ·Hyp2与Dys1的相互作用初步研究和作用界面预测 | 第73-77页 |
| ·Hyp2与Dys1的相互作用研究 | 第73-75页 |
| ·Hyp2与Dys1的作用界面预测 | 第75-77页 |
| ·研究展望 | 第77-78页 |
| 本章总结 | 第78-80页 |
| 第二部分 酿酒酵母碳酸酐酶活性中心的结构研究 | 第80-111页 |
| 第四章 背景介绍 | 第80-90页 |
| ·碳酸酐酶的背景介绍 | 第80-81页 |
| ·碳酸酐酶的介绍 | 第80-81页 |
| ·碳酸酐酶在生物体内的作用 | 第81页 |
| ·碳酸酐酶的分类 | 第81-83页 |
| ·碳酸酐酶的分类依据 | 第81页 |
| ·各类碳酸酐酶的结构特点和分布 | 第81-83页 |
| ·β-CA的研究进展 | 第83-86页 |
| ·β-CA活性区域催化反应的分子机制 | 第86-88页 |
| ·酿酒酵母中的β-CA----Nce103 | 第88-89页 |
| ·Nce103的发现和初步功能研究 | 第88页 |
| ·Nce103的物理化学性质 | 第88-89页 |
| ·本课题的研究目标和内容 | 第89-90页 |
| 第五章 实验材料,设备与方法 | 第90-92页 |
| ·实验材料和设备 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-92页 |
| ·目的蛋白的表达,纯化,结晶以及结构解析 | 第90页 |
| ·碳酸酐酶酶活测定 | 第90-92页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第92-110页 |
| ·Nce103蛋白的表达,纯化和晶体生长 | 第92-93页 |
| ·Nce103蛋白晶体优化之路 | 第93-96页 |
| ·对全长Nce103蛋白的晶体优化 | 第93页 |
| ·Nce103△N13的构建表达和优化 | 第93-96页 |
| ·Nce103△N13蛋白衍射数据的收集与处理 | 第96-97页 |
| ·晶体结构的解析与数据质量分析 | 第97-100页 |
| ·晶体结构解析 | 第97-98页 |
| ·结构质量评估 | 第98-100页 |
| ·Nce103蛋白的三维晶体结构 | 第100-102页 |
| ·Nce103蛋白的锌离子结合位点 | 第102页 |
| ·Nce103蛋白的底物结合位点 | 第102-103页 |
| ·Nce103蛋白与其它β-CA的三维结构比对分析 | 第103-105页 |
| ·预测底物/产物进出活性位点的通道 | 第105-108页 |
| ·Nce103蛋白的N端手臂Motif对于其活性的作用 | 第108-110页 |
| 本章总结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-117页 |
| 附录 | 第117-122页 |
| (1) pET28b(+)载体图谱 | 第117-118页 |
| (2) pET22b(+)载体图谱 | 第118-119页 |
| (3) pET29b(+)载体图谱 | 第119页 |
| (4) 大肠杆菌和毕赤酵母感受态细胞制备方法 | 第119-120页 |
| (5) 亲和层析以及分子筛层析原理 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第123-124页 |
