| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·研究背景 | 第12-13页 |
| ·研究目的和意义 | 第13页 |
| ·木质素生物合成途径及其调控的研究进展 | 第13-20页 |
| ·木质素概述 | 第13-14页 |
| ·木质素的生物合成 | 第14-18页 |
| ·木质素生物合成调控的研究进展 | 第18-20页 |
| ·PAL 基因研究进展 | 第20-22页 |
| ·PAL 的分布 | 第21页 |
| ·PAL 的酶学特性 | 第21-22页 |
| ·植物PAL 基因的克隆 | 第22页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶原核表达系统研究现状 | 第22-23页 |
| ·研究评述 | 第23页 |
| ·研究目标和主要研究内容 | 第23-25页 |
| ·研究目标 | 第23页 |
| ·主要研究内容 | 第23-25页 |
| ·研究技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 毛竹 PAL、CCoAOMT 和 CAD 基因的克隆 | 第26-52页 |
| ·Genome walking 法克隆毛竹 PAL 基因 DNA 序列 | 第26-33页 |
| ·试验材料与试剂 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-33页 |
| ·毛竹PAL 基因DNA 序列中间片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·毛竹PAL 基因组DNA5′、3′端序列的克隆 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定及序列分析 | 第31-32页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第32-33页 |
| ·RACE 法克隆毛竹 PAL1 基因 cDNA 序列 | 第33-45页 |
| ·试验材料与试剂 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-40页 |
| ·毛竹叶片总RNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·毛竹PAL 基因cDNA 中间序列的克隆 | 第34-36页 |
| ·PAL1 基因5′端未知序列的克隆 | 第36-38页 |
| ·PAL1 基因3′端未知序列的克隆 | 第38-40页 |
| ·PAL1 基因全长的拼接及生物信息学分析 | 第40页 |
| ·组织特异性表达 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-45页 |
| ·毛竹叶片总RNA 的提取 | 第40页 |
| ·毛竹PAL1 基因cDNA 中间片段的克隆 | 第40-41页 |
| ·PAL1 基因5′端未知序列的克隆 | 第41页 |
| ·PAL1 基因3′端未知序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·PAL1 基因全长的拼接及生物信息学分析 | 第42-45页 |
| ·组织特异性表达 | 第45页 |
| ·毛竹 CCoAOMT、CAD 基因的克隆 | 第45-49页 |
| ·试验材料与试剂 | 第45-46页 |
| ·试验方法 | 第46页 |
| ·毛竹基因组DNA 的提取 | 第46页 |
| ·引物的设计及PCR 扩增 | 第46页 |
| ·重组、克隆和DNA 序列分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·目的基因片段的PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的鉴定和序列分析 | 第47页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-52页 |
| 第三章 毛竹PAL1 的原核表达及纯化 | 第52-60页 |
| ·原核表达载体 pET16b-PAL1 的构建及目的蛋白的表达 | 第52-54页 |
| ·试验材料与试剂 | 第52页 |
| ·试验方法 | 第52-53页 |
| ·原核表达载体pET16b-PAL1 的构建 | 第52页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-54页 |
| ·镍亲和柱纯化目的蛋白及免疫印迹 | 第54-55页 |
| ·试验材料 | 第54页 |
| ·试验方法 | 第54-55页 |
| ·镍亲和柱纯化目的蛋白 | 第54页 |
| ·目的蛋白的免疫印迹 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55页 |
| ·重组蛋白PAL1 酶学特性研究 | 第55-58页 |
| ·试验材料 | 第55-56页 |
| ·试验方法 | 第56页 |
| ·目的蛋白浓度的测定 | 第56页 |
| ·酶活测定反应 | 第56页 |
| ·Km 的测定 | 第56页 |
| ·最适温度及最适pH 值的测定 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-58页 |
| ·酶活测定反应 | 第56-57页 |
| ·Km 的测定 | 第57页 |
| ·最适温度及最适pH 值的测定 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第四章 毛竹PAL1 等基因植物表达载体的构建及遗传转化 | 第60-67页 |
| ·毛竹 PAL1、CCoAOMT 和 CAD 基因植物表达载体的构建 | 第60-65页 |
| ·试验材料 | 第60页 |
| ·试验方法 | 第60-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-65页 |
| ·毛竹PAL1 基因植物表达载体的构建 | 第64页 |
| ·毛竹CCoAOMT 和CAD 基因植物表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·毛竹 PAL1、CCoAOMT、CAD 基因植物表达载体的遗传转化 | 第65-66页 |
| ·试验材料 | 第65页 |
| ·试验方法 | 第65-66页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化和转基因植株再生 | 第65页 |
| ·转化再生烟草的初步检测 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第67-72页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 附录 | 第82-88页 |
| 在读期间的学术研究 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
