南方根结线虫RNAi胚致死效应基因的筛选与功能鉴定
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·南方根结线虫及其危害 | 第11-14页 |
| ·分类地位 | 第11页 |
| ·形态特征 | 第11-12页 |
| ·起源与分布 | 第12页 |
| ·侵染循环 | 第12-13页 |
| ·寄主范围及为害症状 | 第13页 |
| ·防治 | 第13-14页 |
| ·线虫RNAi研究进展 | 第14-20页 |
| ·秀丽小杆线虫 | 第14-15页 |
| ·RNAi干扰 | 第15-16页 |
| ·RNAi作用机制 | 第16-17页 |
| ·秀丽小杆线虫RNAi研究进展 | 第17-18页 |
| ·根结线虫RNAi研究进展 | 第18-19页 |
| ·秀丽小杆线虫应用于根结线虫的研究 | 第19-20页 |
| ·本论文的研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 2 南方根结线虫RNAi胚致死效应基因的筛选 | 第21-25页 |
| ·南方根结线虫的大量培养与收集纯化 | 第21-22页 |
| ·材料与方法 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22页 |
| ·RNAi胚致死效应基因的筛选 | 第22-23页 |
| ·下载秀丽小杆线虫全基因组蛋白库 | 第23页 |
| ·搜集根结线虫ESTs库 | 第23页 |
| ·blastx比对 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23页 |
| ·小结与讨论 | 第23-25页 |
| 3 RNAi胚致死效应基因的功能鉴定 | 第25-51页 |
| ·材料与方法 | 第25-43页 |
| ·供试材料 | 第25页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·常用试剂配制 | 第26页 |
| ·选定靶标基因片段 | 第26-36页 |
| ·总RNA提取 | 第36页 |
| ·cDNA的合成 | 第36-37页 |
| ·内参检测 | 第37-38页 |
| ·4个南方根结线虫基因部分片段的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·扩增片段的回收、克隆、测序 | 第39-41页 |
| ·载体构建 | 第41-42页 |
| ·HT115菌株电转化感受态的制备 | 第42页 |
| ·连接、转化和筛选 | 第42页 |
| ·秀丽小杆线虫培养及同步化 | 第42页 |
| ·RNAi表型观察 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-50页 |
| ·RNA的提取 | 第43页 |
| ·目的基因片段的克隆 | 第43-45页 |
| ·载体双酶切 | 第45-47页 |
| ·4个南方根结线虫基因RNAi表型鉴定 | 第47-49页 |
| ·RNAi表型统计 | 第49-50页 |
| ·小结与讨论 | 第50-51页 |
| 4 浸泡法验证胚致死效应基因功能 | 第51-61页 |
| ·材料与方法 | 第51-55页 |
| ·供试材料 | 第51页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第51页 |
| ·4个南方根结线虫基因部分片段的PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·载体构建 | 第52-53页 |
| ·质粒提取 | 第53页 |
| ·T7引物PCR扩增及产物纯化 | 第53-54页 |
| ·体外转录合成dsRNA | 第54-55页 |
| ·FITC检测线虫的吞噬行为 | 第55页 |
| ·dsRNA处理线虫 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-59页 |
| ·4个南方根结线虫基因片段的PCR扩增 | 第55页 |
| ·合成dsRNA | 第55-57页 |
| ·FITC检测线虫的吞噬行为 | 第57页 |
| ·dsRNA对南方根结线虫J2幼虫的影响 | 第57-58页 |
| ·浸泡RNAi表型统计 | 第58-59页 |
| ·小结与讨论 | 第59-61页 |
| 5 总结与讨论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录1 英文缩略表 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
