| 中文提要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1. RNAi 研究的历史和发展 | 第9-11页 |
| 2. RNAi 的分子机制 | 第11-13页 |
| 3. RNAi 分子特征 | 第13页 |
| 4. RNAi 相关的蛋白 | 第13-15页 |
| 5. siRNA 的来源 | 第15-17页 |
| ·化学合成 | 第15页 |
| ·体外转录 | 第15-16页 |
| ·用RNaseⅢ消化长片段dsRNA | 第16页 |
| ·利用质粒或病毒载体表达siRNA | 第16页 |
| ·体内siRNA 表达框方法 | 第16-17页 |
| 6. RNAi 的生物学意义及应用 | 第17-19页 |
| ·稳定转座子 | 第17页 |
| ·抗病毒 | 第17页 |
| ·清除异常RNA | 第17页 |
| ·功能基因组学研究 | 第17-18页 |
| ·基因表达调控 | 第18页 |
| ·信号转导通路研究 | 第18页 |
| ·治疗肿瘤 | 第18页 |
| ·遗传疾病研究 | 第18-19页 |
| ·药物筛选 | 第19页 |
| 7. 前景展望与存在问题 | 第19-20页 |
| 8. RNAi 技术在家蚕（细胞）中的研究进展 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-33页 |
| 1 实验材料 | 第23-25页 |
| ·生物材料 | 第23页 |
| ·工具酶及Kit | 第23页 |
| ·主要实验试剂与配制 | 第23-25页 |
| 2 实验常用仪器设备 | 第25-26页 |
| 3 常用方法 | 第26-31页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·碱裂解法制备质粒DNA | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·重组DNA 的转化 | 第28页 |
| ·酶切反应 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·低熔点胶分离回收目的片段 | 第29页 |
| ·家蚕核型多角体病毒DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·细胞的培养和保存 | 第30页 |
| ·细胞转染 | 第30-31页 |
| ·细胞基因组DNA 的提取 | 第31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第三章 表达dsRNA 的RNAi 载体的构建 | 第33-40页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·试验材料 | 第33页 |
| ·ie-1 启动子控制的neo 抗性基因表达的载体构建 | 第33-34页 |
| ·pU6-AntiIE RNAi 表达载体构建 | 第34页 |
| ·piggyantiIE-neo 转基因载体构建 | 第34-36页 |
| ·piggyantiIE-lef1-neo 转基因载体构建 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-38页 |
| ·neo 抗性基因表达载体的构建 | 第37页 |
| ·转基因RNAi 载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·piggyantiIE-neo 载体的构建与鉴定 | 第37页 |
| ·piggyantiIE-lef1-neo 载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| 第四章 转基因RNAi 对BmNPV 增殖的抑制效应 | 第40-54页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·RNAi 瞬时表达质粒对病毒增殖复制的抑制作用 | 第41-42页 |
| ·G418 对转基因细胞的筛选效果 | 第41页 |
| ·病毒母液扩增及滴度测定 | 第41页 |
| ·瞬时转染转基因RNAi 载体对病毒增殖复制的抑制作用 | 第41-42页 |
| ·RNAi 稳定表达细胞对病毒增殖复制的抑制作用 | 第42-43页 |
| ·RNAi 稳定表达细胞的筛选 | 第42页 |
| ·稳定表达RNAi 细胞的拷贝数分析 | 第42页 |
| ·RNAi 稳定表达细胞对病毒增殖复制的抑制作用 | 第42页 |
| ·拆除G418压力筛选后的转基因piggyantiIE-neo细胞对病毒增殖的抑制作用 | 第42-43页 |
| ·稳定表达短ie-1 dsRNA 的转化细胞和稳定表达长ie-1 dsRNA 的转化细胞对BmNPV 增殖的抑制差别 | 第43页 |
| ·病毒在转基因细胞和非转基因细胞中的增殖比较 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-51页 |
| ·G418 对转基因细胞的筛选效果 | 第43页 |
| ·瞬时表达dsRNA 对病毒增殖复制的抑制作用 | 第43-45页 |
| ·稳定表达dsRNA 的转基因细胞对病毒增殖复制的抑制作用 | 第45-46页 |
| ·稳定表达dsRNA 的转基因细胞的筛选 | 第45页 |
| ·稳定转化piggyantiIE-neo 细胞对BmNPV 增殖的抑制效果 | 第45-46页 |
| ·稳定转化piggyantiIE-lef1-neo 细胞对BmNPV 增殖的抑制效果 | 第46-47页 |
| ·表达长、短dsRNA 的稳定转化细胞对BmNPV 增殖的抑制效果差别 | 第47-48页 |
| ·拆除G418 压力筛选后的转基因piggyantiIE-neo 细胞对病毒增殖的抑制作用 | 第48-49页 |
| ·病毒在转基因细胞和非转基因细胞中的增殖比较 | 第49页 |
| ·外源DNA 片段在转基因细胞基因组的插入位点分析 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| 第五章 转基因家蚕研究 | 第54-60页 |
| 1. 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·基因枪喷射导入法 | 第55-56页 |
| ·精子介导基因转移法 | 第56页 |
| ·荧光观察 | 第56页 |
| ·G418 筛选 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-58页 |
| ·转基因家蚕蚕卵荧光观察 | 第57页 |
| ·荧光比列比较 | 第57页 |
| ·转基因蚕的筛选 | 第57-58页 |
| 3. 讨论 | 第58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 主要结论与创新点 | 第60-61页 |
| 主要结论 | 第60页 |
| 创新点 | 第60-61页 |
| 有待继续探讨的问题 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 附录一 本文引用缩略语汇总 | 第62-63页 |
| 附录二 攻读学位期间发表论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 详细摘要 | 第65-66页 |
