| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| Abbreviations | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-38页 |
| ·巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统简介 | 第12-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特点 | 第12-14页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第14-15页 |
| ·宿主菌株 | 第15页 |
| ·表达载体 | 第15-16页 |
| ·表达载体与酵母的整合 | 第16-17页 |
| ·单一交叉插入 | 第16-17页 |
| ·双重交叉替换 | 第17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的应用前景 | 第17-19页 |
| ·RACK1 蛋白研究进展 | 第19-23页 |
| ·RACK1 是WD40 重复蛋白 | 第19-20页 |
| ·动物RACK1 蛋白是一个支架蛋白 | 第20-21页 |
| ·植物中的RACK1 蛋白 | 第21-23页 |
| ·植物中RACK1 的生理功能 | 第23页 |
| ·植物异三聚体G 蛋白研究进展 | 第23-28页 |
| ·G 蛋白概述 | 第23-24页 |
| ·植物异三聚体G 蛋白信号组分 | 第24-28页 |
| ·异三聚体G 蛋白 | 第24-25页 |
| ·G 蛋白偶联受体 | 第25-26页 |
| ·G 蛋白信号调节蛋白（RGS） | 第26-27页 |
| ·G 蛋白偶联的下游效应器 | 第27页 |
| ·异三聚体G 蛋白偶联信号途径 | 第27-28页 |
| ·AtHK1 蛋白 | 第28-29页 |
| ·植物一氧化氮（NO）研究进展 | 第29-32页 |
| ·NO 的生物合成 | 第29-32页 |
| ·NOS 催化产生NO | 第30页 |
| ·NR/NiR 催化产生NO | 第30-31页 |
| ·非酶促反应产生NO | 第31-32页 |
| ·NO 的生理功能 | 第32页 |
| ·保卫细胞中ABA、G 蛋白、NO 信号转导途径 | 第32-37页 |
| ·气孔运动调控 | 第32-33页 |
| ·保卫细胞中 ABA 信号转导途径 | 第33-35页 |
| ·依赖于 Ca~(2+)信号的途径 | 第33-34页 |
| ·不依赖于Ca~(2+)信号的途径 | 第34-35页 |
| ·保卫细胞中G 蛋白信号转导途径 | 第35页 |
| ·保卫细胞中NO 信号转导途径 | 第35-37页 |
| ·研究目的及研究内容 | 第37-38页 |
| 第二章 AtRACK1 及 OsRACK1 基因在毕赤酵母 GS115 中的表达研究 | 第38-58页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·实验材料与方法 | 第39-49页 |
| ·实验材料 | 第39-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第39-40页 |
| ·酶与试剂 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·储备液 | 第41页 |
| ·试剂与缓冲液 | 第41-42页 |
| ·酵母总DNA 抽提液 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE 电泳试剂 | 第42页 |
| ·常用储液 | 第42页 |
| ·主要试验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-49页 |
| ·pMD 18-T simple-AtRACK1/OsRACK1 质粒的构建 | 第42-45页 |
| ·pMD 18-T-OsRACK1、pCup-NuI-MCS-CYC1-AtRACK1 质粒的抽提 | 第43页 |
| ·引物设计与PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·凝胶回收PCR 产物 | 第44页 |
| ·目的基因连接到pMD 18-T simple vector | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·大肠杆菌（E.coli）DH5α的转化 | 第45页 |
| ·AtRACK1/OsRACK1 基因的PCR 检测 | 第45页 |
| ·重组质粒pPIC9K-AtRACK1 及pPIC9-OsRACK1 的构建 | 第45-46页 |
| ·pMD 18-T simple-AtRACK1/OsRACK1 和 pPIC9K/pPIC9 的抽提 | 第45页 |
| ·pMD 18-T simple-AtRACK1/OsRACK1 和 pPIC9K/pPIC9 分别双酶切及纯化回收 | 第45-46页 |
| ·表达载体pPIC9K-AtRACK1 及pPIC9-OsRACK1 的构建 | 第46页 |
| ·毕赤酵母GS115 感受态细胞的制备及转化 | 第46-48页 |
| ·毕赤酵母 GS115 感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·线性化重组质粒pPIC9K-AtRACK1 及pPIC9-OsRACK1 | 第46页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第46-47页 |
| ·表达菌株的PCR 检测确定 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第47页 |
| ·AtRACK1/OsRACK1 基因的PCR 检测 | 第47-48页 |
| ·AtRACK1/OsRACK1 基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的制备及发酵上清液的SDS-PAGE 电泳分析 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的制备 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第48-49页 |
| ·实验结果与分析 | 第49-56页 |
| ·AtRACK1/OsRACK1 基因的PCR 扩增 | 第49页 |
| ·AtRACK1/OsRACK1 基因在pMD 18-T simple vector 上的克隆 | 第49-51页 |
| ·重组质粒pPIC9K-AtRACK1 及pPIC9-OsRACK1 的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·酵母的电转化及重组子的筛选 | 第52-54页 |
| ·重组质粒pPIC9K-AtRACK1 及pPIC9-OsRACK1 的线性化 | 第52页 |
| ·重组子的筛选 | 第52-54页 |
| ·酵母菌总DNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·重组酵母总DNA 中的AtRACK1/OsRACK1 基因 PCR 检测 | 第54页 |
| ·AtRACK1/OsRACK1 蛋白的诱导表达及SDS-PAGE 电泳分析 | 第54-56页 |
| ·重组菌的光学显微镜检测 | 第54-55页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第三章 拟南芥 RACK1 蛋白在 ABA 诱导保卫细胞中 NO 生成及在ABA 调控气孔运动中的作用 | 第58-73页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·材料与方法 | 第59-62页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·药品和试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·植物栽培 | 第61页 |
| ·NO 荧光探针的装载 | 第61页 |
| ·荧光显微镜记录保卫细胞内NO 的变化 | 第61-62页 |
| ·气孔关闭的生物分析 | 第62页 |
| ·气孔开放的生物分析 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-70页 |
| ·拟南芥各基因型保卫细胞内NO 荧光的变化 | 第62-66页 |
| ·ABA、SNP 对拟南芥各基因型气孔关闭的影响 | 第66-68页 |
| ·ABA、SNP 对拟南芥各基因型气孔开放的影响 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 拟南芥各基因型气孔密度的比较及气孔显微观察 | 第73-80页 |
| ·引言 | 第73-75页 |
| ·材料与方法 | 第75页 |
| ·实验材料 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75页 |
| ·气孔密度试验 | 第75页 |
| ·气孔形态观察 | 第75页 |
| ·实验仪器 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-78页 |
| ·各基因型的叶片形态 | 第75-76页 |
| ·各基因型的气孔密度 | 第76-77页 |
| ·各基因型的气孔形态 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 结论与展望 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 附录 | 第93-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
