| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 综述 | 第12-32页 |
| 一、小麦贮藏蛋白的分类 | 第12-13页 |
| 二、小麦醇溶蛋白的研究方法 | 第13-17页 |
| 1.酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE) | 第13-14页 |
| 2.反相高效液相色谱(RP-HPLC) | 第14-15页 |
| 3.高效毛细管电泳(HPCE) | 第15-16页 |
| 4.双向凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE) | 第16-17页 |
| 5.质谱(Mass Spectrometry,MS)技术 | 第17页 |
| 三、小麦醇溶蛋白的组成及分子遗传 | 第17-24页 |
| 1.醇溶蛋白的组成及分子结构 | 第17-22页 |
| 2.醇溶蛋白的基因定位及遗传多态性 | 第22-24页 |
| 四、小麦醇溶蛋白与品质的关系 | 第24-27页 |
| 五、分子生物学方法在醇溶蛋白研究上的应用 | 第27-30页 |
| 1.醇溶蛋白的基因克隆 | 第27-28页 |
| 2.醇溶蛋白基因的体外表达 | 第28-29页 |
| 3.对小麦醇溶蛋白基因克隆方法的探索与展望 | 第29-30页 |
| 六、本研究的基本思路和目标 | 第30-32页 |
| 1.普通小麦及其近缘种α-醇溶蛋白的分离与鉴定 | 第30页 |
| 2.普通小麦及其近缘种α-醇溶蛋白编码基因的克隆与序列分析 | 第30-31页 |
| 3.克隆基因的原核表达 | 第31-32页 |
| 材料与方法 | 第32-47页 |
| 一、实验材料 | 第32页 |
| 二、α-醇溶蛋白的分离与鉴定 | 第32-35页 |
| 1.反向高效液相色谱(RP-HPLC)分析 | 第32-34页 |
| 2.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析 | 第34-35页 |
| 三、α-醇溶蛋白编码基因的分子克隆 | 第35-42页 |
| 1.仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.小麦基因组DNA提取 | 第36页 |
| 3.灌浆期小麦总RNA的提取及cDNA的合成 | 第36-38页 |
| 4.PCR扩增 | 第38-40页 |
| 5.T-Vector基因克隆 | 第40-42页 |
| 6.序列比较、同源性分析 | 第42页 |
| 四、α-醇溶蛋白编码基因在大肠杆菌中的体外表达 | 第42-47页 |
| 1.表达载体和菌株 | 第42页 |
| 2.α-醇溶蛋白编码基因表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.α-醇溶蛋白编码基因的E.coli蛋白表达、提取及SDS-PAGE检测 | 第44-47页 |
| 结果分析 | 第47-69页 |
| 一、α-醇溶蛋白的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析 | 第47-49页 |
| 二、α-醇溶蛋白的质谱(MALDI-TOF-MS)分析 | 第49-51页 |
| 三、粗山羊草α-醇溶蛋白编码基因的PCR扩增和克隆 | 第51页 |
| 四、α-醇溶蛋白基因及蛋白序列特征分析 | 第51-59页 |
| 五、克隆基因与其它已知基因编码的蛋白序列比较分析 | 第59-62页 |
| 六、克隆基因的染色体定位 | 第62-64页 |
| 七、醇溶蛋白氨基酸序列的聚类分析 | 第64-66页 |
| 八、α-醇溶蛋白的编码基因在大肠杆菌中的体外表达 | 第66-69页 |
| 1.α-醇溶蛋白编码基因原核表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 2.α-醇溶蛋白编码基因原核表达载体的蛋白表达 | 第67-69页 |
| 讨论 | 第69-74页 |
| 一、α-醇溶蛋白的RP-HPLC和MS分析 | 第69页 |
| 二、α-醇溶蛋白的分子克隆 | 第69-70页 |
| 三、α-醇溶蛋白基因结构特点及染色体定位 | 第70-72页 |
| 四、醇溶蛋白基因的同源性分析 | 第72页 |
| 五、α-醇溶蛋白编码基因的原核表达 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 作者简历 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
