| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 引言 | 第15-24页 |
| 第一章 酸酐类双功能试剂螯合稀土金属元素标记结合生物质谱的检测定量蛋白质组新方法 | 第24-42页 |
| 1 材料与方法 | 第25-28页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-26页 |
| ·双酸酐标记反应条件优化 | 第25-26页 |
| ·肌红蛋白的酶切 | 第26页 |
| ·胰岛素的酶切 | 第26页 |
| ·标准蛋白混合物体系的制备和酶切 | 第26页 |
| ·双酸酐试剂标记和螯合反应条件优化 | 第26页 |
| ·生物质谱分析方法和数据库检索 | 第26-28页 |
| ·分析样本准备 | 第26-27页 |
| ·LC-Q-TOF MS/MS分析条件 | 第27页 |
| ·LC-MALDI TOF/TOF分析条件 | 第27-28页 |
| ·数据库检索 | 第28页 |
| 2 结果与讨论 | 第28-40页 |
| ·方法原理 | 第28-29页 |
| ·双功能试剂DTPA标记反应条件优化 | 第29-31页 |
| ·伯氨基标记反应特异性考查 | 第31-34页 |
| ·标记肽段的稳定性考查 | 第34-35页 |
| ·标记肽段的色谱行为与质谱裂解行为考查 #2l | 第35-36页 |
| ·离子抑制现象 | 第36-37页 |
| ·方法的动态范围 | 第37页 |
| ·方法实用性的考查 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 第二章 酸酐类双功能试剂修饰辅助的~(18)O标记结合生物质谱检测的蛋白质组双重定量新策略 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·六种标准蛋白混合物的配置与酶切 | 第43-44页 |
| ·蛋白质肽段的两种~(18)O标记方法 | 第44页 |
| ·色谱分离与在线点靶 | 第44页 |
| ·质谱分析 | 第44-45页 |
| 2 结果与讨论 | 第45-51页 |
| ·方法原理 | 第45-46页 |
| ·双功能试剂与肽段氨基的标记特异性 | 第46页 |
| ·肌红蛋白肽段的~(18)O标记效率 | 第46-47页 |
| ·肽段C端~(18)O标记时间考查 | 第47-48页 |
| ·~(18)O标记肽段的稳定性 | 第48-49页 |
| ·标记肽段的质谱裂解行为的考查 | 第49页 |
| ·方法的动态范围 | 第49-50页 |
| ·定量软件 | 第50-51页 |
| ·方法实用性的考查 | 第51页 |
| 3 小结 | 第51-55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 第三章 酸酐类双功能试剂修饰辅助的~(18)O双重定量策略在YHB1基因敲除的酵母差异蛋白质组研究中的应用 | 第56-76页 |
| 1 材料与方法 | 第57-63页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·酵母及其培养基 | 第57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-63页 |
| ·酵母YHB1基因敲除株的PCR实验确证 | 第57-59页 |
| ·引物的设计与合成 | 第57-58页 |
| ·YHB1 cDNA的扩增 | 第58-59页 |
| ·T载体的测序 | 第59页 |
| ·酿酒酵母菌株的培养 | 第59页 |
| ·酵母细胞蛋白质的提取 | 第59-60页 |
| ·提取蛋白质的浓度测定 | 第60页 |
| ·一维聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第60页 |
| ·酵母细胞提取溶液蛋白质的酶切 | 第60-61页 |
| ·酶切肽段的双酸酐试剂DTPA修饰的与~(18)O标记 | 第61页 |
| ·强离子交换色谱分离 | 第61页 |
| ·LC-LTQ-FT分析条件 | 第61-62页 |
| ·LC-LTQ-FT反相色谱条件 | 第61-62页 |
| ·LC-LTQ-FT质谱分析条件 | 第62页 |
| ·数据检索 | 第62-63页 |
| ·蛋白质定量结果计算 | 第63页 |
| ·生物信息学分析 | 第63页 |
| ·酵母差异蛋白质组数据的功能意义分析 | 第63页 |
| 2 结果与讨论 | 第63-69页 |
| ·酵母YHB1基因敲除的酵母菌株PCR实验确证 | 第63-64页 |
| ·酵母蛋白质提取方法 | 第64-66页 |
| ·LC-LTQ-FT质谱分析 | 第66-67页 |
| ·~(18)O双重定量策略定量准确性考查 | 第67-68页 |
| ·酵母CG1945与△YHB1_CG1945的差异蛋白质组研究 | 第68-69页 |
| ·强离子交换色谱分离实验 | 第68页 |
| ·定量结果计算 | 第68-69页 |
| ·差异蛋白质功能的初步分析 | 第69页 |
| 3 小结 | 第69-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 第四章 酸酐类双功能试剂修饰辅助的~(18)O双重定量策略在NO刺激相关的△YHB1酵母差异蛋白质组研究中的应用 | 第76-91页 |
| 1 材料与方法 | 第77-79页 |
| ·材料 | 第77页 |
| ·试剂 | 第77页 |
| ·酵母及其培养基 | 第77页 |
| ·主要仪器设备 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-79页 |
| ·酿酒酵母菌株的培养 | 第77-78页 |
| ·酵母细胞的提取 | 第78页 |
| ·提取蛋白质的浓度测定 | 第78页 |
| ·酵母细胞提取溶液的酶切 | 第78页 |
| ·酶切肽段的双酸酐试剂DTPA化学修饰的~(18)O标记 | 第78页 |
| ·强离子交换色谱分离实验条件 | 第78-79页 |
| ·LTQ-FT分析条件 | 第79页 |
| ·数据检索 | 第79页 |
| ·蛋白质定量结果计算 | 第79页 |
| ·生物信息学分析 | 第79页 |
| ·酵母差异蛋白质组数据的功能意义分析 | 第79页 |
| 2 结果与讨论 | 第79-84页 |
| ·基于LC-LTQ-FT的差异蛋白定量结果 | 第79-80页 |
| ·△YHB1酵母在NO刺激与不刺激条件下的差异蛋白质分类 | 第80-81页 |
| ·差异蛋白质的功能与NO相关的信号转导通路的初步讨论 | 第81-84页 |
| 3 小结 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第五章 酸酐类双功能试剂修饰辅助的蛋白质N端肽的富集测定新方法初步研究 | 第91-102页 |
| 1 材料与方法 | 第92-94页 |
| ·材料 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-94页 |
| ·蛋白质N端的DTPA双酸酐试剂标记 | 第92页 |
| ·肽段混合物阳离子交换色谱实验条件和Zip Tip脱盐点靶 | 第92-93页 |
| ·质谱分析 | 第93页 |
| ·数据处理 | 第93-94页 |
| 2 结果与讨论 | 第94-98页 |
| ·方法的原理 | 第94-95页 |
| ·肌红蛋白N端肽的双功能试剂DTPA标记 | 第95-96页 |
| ·双功能试剂DTPA标记的肌红蛋白N端的酶切肽段色谱分离与质谱鉴定 | 第96-98页 |
| 3 小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 结语 | 第102-104页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 文献综述 | 第108-113页 |
| 发表文章 | 第113-120页 |
