| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-12页 |
| 中文文摘 | 第12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-30页 |
| ·蜘蛛丝的研究概况 | 第12-16页 |
| ·蜘蛛丝的特性 | 第12-13页 |
| ·蜘蛛丝的理化性质 | 第12页 |
| ·蜘蛛丝的结构与力学性能 | 第12-13页 |
| ·蛛丝蛋白的基因工程 | 第13-15页 |
| ·不同宿主表达蛛丝蛋白 | 第13-14页 |
| ·国内蛛丝蛋白基因研究 | 第14-15页 |
| ·蜘蛛丝的应用前景 | 第15-16页 |
| ·人造皮肤 | 第15页 |
| ·人工肌腱 | 第15页 |
| ·军事及民用防护领域 | 第15-16页 |
| ·基因工程大肠杆菌高密度培养 | 第16-18页 |
| ·影响大肠杆菌高密度发酵的主要因素 | 第16-18页 |
| ·宿主菌 | 第16-17页 |
| ·质粒载体 | 第17页 |
| ·高密度培养条件 | 第17-18页 |
| ·基因重组蛋白纯化研究进展 | 第18-24页 |
| ·表达系统 | 第18-20页 |
| ·表达系统的类型 | 第18-20页 |
| ·包涵体的处理 | 第20页 |
| ·主要分离纯化方法 | 第20-24页 |
| ·样品准备与预处理 | 第20-21页 |
| ·层析技术 | 第21-23页 |
| ·其他方法 | 第23-24页 |
| ·组织工程生物材料 | 第24-28页 |
| ·生物材料及生物相容性的概念 | 第24-25页 |
| ·应用于组织工程相关材料概况 | 第25-27页 |
| ·人工合成可降解聚合物 | 第25-26页 |
| ·天然高分子聚合物 | 第26-27页 |
| ·生物材料体内植入 | 第27页 |
| ·蛛丝蛋白作为生物材料的应用前景 | 第27-28页 |
| ·本研究的背景、主要内容及意义 | 第28-30页 |
| ·本研究的背景材料 | 第28页 |
| ·本研究的主要内容 | 第28页 |
| ·本研究的意义 | 第28-30页 |
| 第2章 基因重组蛛丝蛋白工程菌pNS2/BL21(DE3)高密度发酵条件的优化 | 第30-48页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·菌株和重组质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·仪器与设备 | 第30页 |
| ·培养基与主要溶液 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| ·pNS2/BL21(DE3)工程菌的重新转化 | 第31-32页 |
| ·制备感受态细胞 | 第31页 |
| ·pNS2重组质粒的小量制备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·新转化的pNS2/BL21(DE3)的摇瓶诱导表达筛选高活性菌株 | 第32页 |
| ·蛛丝蛋白基因工程菌pNS2/BL21(DE3)的高密度发酵 | 第32-33页 |
| ·种子液的制备 | 第32页 |
| ·培养基与发酵罐的灭菌 | 第32页 |
| ·发酵过程的控制 | 第32页 |
| ·目的蛋白诱导表达 | 第32-33页 |
| ·高密度发酵正交实验设计及方法 | 第33-34页 |
| ·实验设计 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34页 |
| ·分析方法 | 第34-35页 |
| ·菌体浓度 | 第34页 |
| ·细胞湿重与干重测定 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| ·重组蛛丝蛋白表达含量的测定 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-45页 |
| ·pNS2/BL21(DE3)的摇瓶诱导表达筛选高活性菌株 | 第35页 |
| ·pNS2/BL21(DE3)高密度发酵正交实验 | 第35-39页 |
| ·对基因工程菌表达蛋白的几个影响因素 | 第39-41页 |
| ·前体物添加量的影响 | 第39页 |
| ·IPTG浓度的影响 | 第39-40页 |
| ·pH的影响 | 第40页 |
| ·温度的影响 | 第40-41页 |
| ·对发酵工艺条件的优化 | 第41-45页 |
| ·同组次诱导表达水平 | 第41-42页 |
| ·发酵工艺条件的确立 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·结论 | 第46-48页 |
| 第3章 基因重组蛛丝蛋白规模化纯化方法的优化 | 第48-64页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·常用溶液 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·小量重组蛛丝蛋白纯化方法的优化 | 第49-51页 |
| ·超声破碎细胞 | 第49页 |
| ·加热对重组蛋白的影响 | 第49-50页 |
| ·pH对重组蛋白的影响 | 第50页 |
| ·硫酸铵饱和度对重组蛋白的影响 | 第50页 |
| ·等电点pH对重组蛋白的影响 | 第50-51页 |
| ·规模化重组蛛丝蛋白纯化方法的优化 | 第51页 |
| ·超声破碎细胞 | 第51页 |
| ·加热、调酸、调硫酸铵饱和度分离目的蛋白 | 第51页 |
| ·目的蛋白透析与冻干 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-60页 |
| ·小量重组蛛丝蛋白纯化方法的优化 | 第51-56页 |
| ·超声破碎细胞 | 第51-53页 |
| ·加热对重组蛋白的影响 | 第53-54页 |
| ·pH对重组蛋白的影响 | 第54页 |
| ·(NH_4)_2SO_4饱和度对重组蛋白的影响 | 第54-55页 |
| ·调等电点目的蛋白的影响 | 第55-56页 |
| ·规模化重组蛛丝蛋白纯化方法的优化 | 第56-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·小量重组蛛丝蛋白纯化方法的优化 | 第60-62页 |
| ·破碎方法 | 第60-61页 |
| ·加热、pH、硫酸铵饱和度对重组蛋白纯化的优化 | 第61-62页 |
| ·规模化重组蛛丝蛋白纯化方法的优化 | 第62-63页 |
| ·新工艺关键步骤 | 第63页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| 第4章 重组蛛丝蛋白支架材料的组织相容性研究 | 第64-80页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·主要材料 | 第64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·主要仪器和器械 | 第64页 |
| ·仪器 | 第64页 |
| ·手术器械 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64-65页 |
| ·支架制备试剂 | 第64页 |
| ·植入手术试剂 | 第64页 |
| ·HE染色试剂 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·支架制备 | 第65页 |
| ·植入前支架处理 | 第65页 |
| ·创伤模型 | 第65-66页 |
| ·组织学石蜡切片步骤 | 第66页 |
| ·组织学石蜡染色 | 第66页 |
| ·组织学评价 | 第66-67页 |
| ·结果 | 第67-77页 |
| ·支架制备 | 第67页 |
| ·植入手术 | 第67-68页 |
| ·术后大体观察 | 第68-70页 |
| ·植入材料 HE染色结果 | 第70-77页 |
| ·材料植入3天 HE染色结果 | 第70-72页 |
| ·材料植入7天 HE染色结果 | 第72-75页 |
| ·材料植入30天 HE染色结果 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77页 |
| ·结论 | 第77-80页 |
| 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 个人简历 | 第94-96页 |
