人源性bFGF Fab抗体体外亲和力成熟的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 缩略语表 | 第8-10页 |
| 第一部分 前言 | 第10-15页 |
| 1 抗体亲和力和体内抗体亲和力成熟过程 | 第10页 |
| 2 基因工程抗体体外亲和力成熟 | 第10-14页 |
| ·随机突变编码可变区的基因片段 | 第11-13页 |
| ·定向引入突变 | 第13-14页 |
| 3 结合有效的建库方法,多策略组合应用 | 第14页 |
| 4 结语 | 第14-15页 |
| 5.本研究的设计思路 | 第15页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第15-35页 |
| ·实验材料 | 第15-18页 |
| ·质粒、载体和菌株 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要试剂配制方法 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·技术路线 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-35页 |
| ·将Fd段、κ链基因连入pComb3H载体 | 第19-23页 |
| ·pComb3H-6的可溶性表达 | 第23-25页 |
| ·对Fd段进行突变 | 第25-29页 |
| ·Fab噬菌体抗体突变库的构建 | 第29-31页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第31-32页 |
| ·噬菌体抗体的制备及鉴定 | 第32-33页 |
| ·Fab的可溶性表达 | 第33页 |
| ·菌体裂解液上清中Fab浓度的测定 | 第33页 |
| ·菌体裂解液上清中Fab的相对亲和力测定 | 第33-35页 |
| 第三部分 结果 | 第35-46页 |
| ·将Fd段、κ链基因连入pComb3H载体 | 第35-36页 |
| ·pComb3H-6可溶性表达 | 第36-37页 |
| ·对Fd进行突变 | 第37-39页 |
| ·Fab噬菌体抗体突变库的构建 | 第39页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第39-40页 |
| ·噬菌体抗体的制备及鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·可溶性表达 | 第41-43页 |
| ·菌体裂解液上清中Fab浓度的测定 | 第43-45页 |
| ·菌体裂解液上清中Fab的相对亲和力测定 | 第45-46页 |
| 第四部分 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
