| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| ·神经营养素家族 | 第13-22页 |
| ·神经营养素家族成员分子结构及表达 | 第13-16页 |
| ·神经营养素受体 | 第16-18页 |
| ·神经营养素的生物学作用 | 第18-22页 |
| ·胶质细胞源性神经营养因子家族及其家族受体 | 第22页 |
| ·其它神经营养因子 | 第22-23页 |
| ·白细胞介素-6细胞因子家族 | 第22页 |
| ·成纤维细胞生长因子 | 第22-23页 |
| ·胰岛素样生长因子 | 第23页 |
| ·表皮生长因子家族 | 第23页 |
| ·研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 2 材料 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·细胞培养基和血清 | 第25页 |
| ·载体 | 第25页 |
| ·酶和生化试剂 | 第25-26页 |
| ·人神经营养素-3引物 | 第26页 |
| ·主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| 3 方法 | 第27-35页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA克隆与序列分析 | 第27-30页 |
| ·人胎脑组织总RNA提取 | 第27页 |
| ·人胎脑cDNA的合成 | 第27页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第28页 |
| ·PCR纯化产物与克隆载体的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·重组克隆载体的转化 | 第29页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第29页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA序列测定与结果分析 | 第30页 |
| ·重组人神经营养素-3在大肠杆菌中的表达 | 第30-32页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA与原核表达载体的制备 | 第30-31页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA与原核表达载体的连接 | 第31页 |
| ·重组原核表达载体的转化 | 第31页 |
| ·阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·阳性重组质粒转化表达宿主菌及鉴定 | 第31页 |
| ·重组人神经营养素-3在大肠杆菌中的表达操作 | 第31-32页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第32页 |
| ·包涵体的溶解及融合蛋白的复性 | 第32-33页 |
| ·包涵体的溶解 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白的复性 | 第33页 |
| ·重组人神经营养素-3融合蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·谷胱甘肽琼脂糖树脂的处理 | 第33页 |
| ·纯化大肠杆菌中表达的融合蛋白 | 第33页 |
| ·谷胱甘肽琼脂糖树脂的再生与保存 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的浓缩 | 第34页 |
| ·融合蛋白的浓度测定 | 第34页 |
| ·重组人神经营养素-3融合蛋白生物学活性的检测 | 第34-35页 |
| ·分离新生鼠脑组织 | 第34页 |
| ·新生鼠大脑皮质神经元的分离与培养 | 第34-35页 |
| 4 实验结果 | 第35-44页 |
| ·人神经营养素-3 CDNA克隆与序列分析 | 第35-37页 |
| ·人胎脑组织总RNA提取 | 第35页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA的RT-PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第35页 |
| ·重组克隆质粒pGEM-T-hNT-3的鉴定 | 第35-36页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA序列测定与结果分析 | 第36-37页 |
| ·人神经营养素-3在大肠杆菌中的表达 | 第37-40页 |
| ·人神经营养素-3原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组人神经营养素-3在大肠杆菌中的表达 | 第38-40页 |
| ·重组人神经营养素-3融合蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白浓度测定 | 第41页 |
| ·重组人神经营养素-3融合蛋白生物学活性的检测 | 第41-44页 |
| 5 讨论 | 第44-51页 |
| ·RNA的完整性 | 第44页 |
| ·人神经营养素-3 cDNA的扩增 | 第44页 |
| ·克隆载体与原核表达载体的选择 | 第44-45页 |
| ·包涵体的溶解及蛋白的复性 | 第45-47页 |
| ·包涵体的形成及溶解 | 第45-46页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第46-47页 |
| ·人神经营养素-3融合蛋白生物学活性的检测 | 第47-48页 |
| ·重组人神经营养素-3在神经系统疾病治疗中的应用及前景 | 第48-51页 |
| 6 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录A | 第58-59页 |
| 附录B | 第59-60页 |
| 附录C | 第60-62页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第62页 |