| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-32页 |
| 1 柑橘抗寒研究现状 | 第12-17页 |
| ·质膜与抗寒性的研究 | 第12页 |
| ·活性氧清除系统与抗寒性的研究 | 第12-13页 |
| ·可溶性蛋白质与抗寒性的研究 | 第13页 |
| ·渗透调节物质与抗寒性的研究 | 第13-14页 |
| ·内源激素、生长调节剂与抗寒性的研究 | 第14-15页 |
| ·多胺与抗寒性的研究 | 第15页 |
| ·人工锻炼与抗寒性的研究 | 第15页 |
| ·植物组织形态结构与抗寒性的研究 | 第15-16页 |
| ·质壁分离与与植物抗寒性的研究 | 第16页 |
| ·光合能力、呼吸强度与抗寒性的研究 | 第16页 |
| ·功能基因与抗寒性的研究 | 第16-17页 |
| 2 mRNA水平研究基因的差异表达 | 第17-25页 |
| ·表达序列标签技术 | 第17-18页 |
| ·基因表达序列分析 | 第18-19页 |
| ·cDNA微阵列技术 | 第19页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第19-20页 |
| ·代表性差异分析法 | 第20页 |
| ·抑制差减杂交技术 | 第20-25页 |
| 3 蛋白质水平研究基因的差异表达 | 第25-29页 |
| ·蛋白质组的概念 | 第26页 |
| ·蛋白质的分离 | 第26-27页 |
| ·蛋白质的鉴定 | 第27-28页 |
| ·蛋白质的信息处理 | 第28-29页 |
| 4 研究的目的意义 | 第29-30页 |
| 5 技术路线 | 第30-32页 |
| 第二章 枳和宫本温州蜜柑适宜冷处理温度的摸索 | 第32-42页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·低温处理 | 第32页 |
| ·抗寒生化物质的测定 | 第32-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-40页 |
| ·低温处理对根际土壤温度和柑橘根系的影响 | 第34-36页 |
| ·低温处理后枳和宫本叶片受冻形态观察 | 第36-37页 |
| ·叶片电解质渗出率与试材抗寒性的关系 | 第37页 |
| ·CAT和POD活性与试材抗寒性的关系 | 第37-39页 |
| ·叶片中Pro含量与试材抗寒性的关系 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 应用抑制性差减杂交克隆冷诱导基因 | 第42-58页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| ·材料及处理 | 第42-43页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-46页 |
| ·总RNA提取 | 第43页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第43-44页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第44页 |
| ·PCR产物纯化及克隆转化 | 第44页 |
| ·阳性克隆测序 | 第44页 |
| ·测序EST的同源性分析 | 第44页 |
| ·柑橘几丁质酶基因的Northern表达分析 | 第44-46页 |
| ·序列提交GenBank | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·抑制性差减杂交方法的优化与改进 | 第46-51页 |
| ·总RNA提取和mRNA分离纯化结果 | 第46-47页 |
| ·dscDNA合成及其RSAI酶切效率分析 | 第47-48页 |
| ·接头连接效率分析结果 | 第48-49页 |
| ·PCR产物检测结果 | 第49-51页 |
| ·差减效率检测 | 第51页 |
| ·冷诱导基因的克隆与分析 | 第51-54页 |
| ·阳性克隆检测结果 | 第51页 |
| ·测序EST的同源性分析 | 第51-53页 |
| ·柑橘几丁质酶基因的Northern表达分析 | 第53页 |
| ·序列提交结果 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·低温锻炼与相关基因的表达 | 第54-56页 |
| ·SSH方法在柑橘研究上的应用与改进 | 第56页 |
| 4 小结 | 第56-58页 |
| 第四章 冷诱导基因Ptcor8全长分析、功能预测和表达分析 | 第58-78页 |
| 第1节 冷诱导基因Ptcor8 cDNA全长分析 | 第58-64页 |
| 1 方法 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-63页 |
| ·序列翻译与ORF预测 | 第59-60页 |
| ·与同源蛋白质家族的比较 | 第60-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 第2节 冷诱导基因Ptcor8的功能预测 | 第64-75页 |
| 1 方法 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-74页 |
| ·蛋白质理化性质预测分析 | 第64-66页 |
| ·蛋白质的亚细胞定位 | 第66-69页 |
| ·蛋白质跨膜结构预测 | 第69-70页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第70-71页 |
| ·蛋白质基序和结构域预测 | 第71-72页 |
| ·蛋白质磷酸化位点分析 | 第72页 |
| ·分子系统发育分析 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 第3节 冷诱导基因Ptcor8表达初步分析 | 第75-77页 |
| 1 材料与方法 | 第75-76页 |
| ·材料处理 | 第75页 |
| ·总RNA提取 | 第75页 |
| ·单链cDNA的合成 | 第75页 |
| ·半定量内参引物扩增 | 第75-76页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77页 |
| 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 应用蛋白质组方法分离克隆冷诱导基因 | 第78-95页 |
| 第1节 柑橘冷诱导蛋白质的分离与鉴定 | 第78-90页 |
| 1 材料与方法 | 第78-82页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第78-79页 |
| ·试材的处理 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·蛋白质的提取 | 第79页 |
| ·蛋白质的分离纯化 | 第79-81页 |
| ·双向凝胶电泳图谱分析 | 第81页 |
| ·部分差异蛋白质点的质谱鉴定 | 第81-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-89页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第82-83页 |
| ·SDS-PAGE凝胶浓度的确定 | 第83页 |
| ·低温胁迫相关蛋白质的检测 | 第83-85页 |
| ·柑橘低温响应有关蛋白质的质谱鉴定 | 第85-89页 |
| ·枳叶片低温响应有关蛋白质的质谱鉴定 | 第85-86页 |
| ·宫本叶片低温响应有关蛋白质的质谱鉴定 | 第86-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| ·几个蛋白质的表达与低温响应的关系 | 第89-90页 |
| ·蛋白质组分析技术在柑橘研究上的思考 | 第90页 |
| 第2节 冷诱导蛋白质Ptcorp编码基因的克隆与表达分析 | 第90-94页 |
| 1 材料与方法 | 第90-92页 |
| ·材料处理 | 第90-91页 |
| ·简并引物设计 | 第91页 |
| ·总DNA提取 | 第91页 |
| ·兼并引物以总DNA为模版的扩增 | 第91-92页 |
| ·扩增片段回收、克隆转化及测序 | 第92页 |
| ·测序片段序列分析及特异引物设计 | 第92页 |
| ·半定量RT-PCR表达分析 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-94页 |
| ·简并引物扩增结果 | 第92-93页 |
| ·克隆测序和同源性比对结果 | 第93页 |
| ·半定量RT-PCR结果 | 第93-94页 |
| 3 讨论 | 第94页 |
| 本章小结 | 第94-95页 |
| 结论及创新之处 | 第95-97页 |
| 下一步工作设想 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 附录 | 第108-124页 |
| 附录A 测序结果 | 第108-113页 |
| 附录B 不同低温处理下枳和宫本叶片蛋白质双向电泳图谱 | 第113-114页 |
| 附录C 部分差异表达蛋白质点肽质量指纹图谱 | 第114-120页 |
| 附录D 抑制性差减杂交接头和引物序列 | 第120-121页 |
| 附录E pGEM-T Easy Vector质粒图和多克隆位点 | 第121-122页 |
| 附录F 缩略词表 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 个人简历 | 第125页 |
| 在读期间主持和参加的科研课题 | 第125-126页 |
| 在读期间参编的著作和公开发表的学术论文 | 第126页 |
