| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩写符号 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-30页 |
| ·启动子研究 | 第14-18页 |
| ·核心启动子区 | 第14-15页 |
| ·特异启动子区 | 第15-16页 |
| ·植物中受水杨酸调控的启动子的研究 | 第16-17页 |
| ·植物中受茉莉酸类调控的启动子的研究 | 第17-18页 |
| ·启动子的研究方法 | 第18-26页 |
| ·启动子序列的克隆 | 第18-21页 |
| ·启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第18-19页 |
| ·利用 PCR 技术克隆启动子序列 | 第19-21页 |
| ·启动子序列预测 | 第21页 |
| ·启动子序列的体外诱变 | 第21-22页 |
| ·缺失突变 | 第21-22页 |
| ·衔接物扫描突变 | 第22页 |
| ·定点突变 | 第22页 |
| ·报告基因的研究进展 | 第22-25页 |
| ·荧光蛋白 | 第23-24页 |
| ·荧光素酶报告基因 | 第24页 |
| ·β-半乳糖苷酶报告基因 | 第24-25页 |
| ·β-葡萄糖苷酸酶报告基因 | 第25页 |
| ·启动子表达特征的研究方法 | 第25-26页 |
| ·植物糖基转移酶概述 | 第26-29页 |
| ·植物糖基转移酶的功能 | 第26-28页 |
| ·合成细胞壁多糖 | 第26-27页 |
| ·合成植物糖蛋白 | 第27页 |
| ·将糖基加到小分子上 | 第27-28页 |
| ·诱导糖基转移酶基因表达的因素 | 第28-29页 |
| ·GTs 基因启动子研究 | 第29页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 2 GT 基因启动子5’-部分缺失的重组表达载体的构建 | 第30-42页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·实验试剂 | 第31-33页 |
| ·化学试剂与生化试剂 | 第31页 |
| ·常用缓冲液和试剂的成分及配制 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·实验设计 | 第33-34页 |
| ·启动子序列分析 | 第33-34页 |
| ·实验设计 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-40页 |
| ·碱裂解法大量制备质粒DNA | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| ·制备 | 第35-36页 |
| ·转化 | 第36页 |
| ·PCR 扩增 GT 启动子片断 | 第36-38页 |
| ·引物合成 | 第36页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第37页 |
| ·PCR 产物的限制性内切酶消化 | 第37页 |
| ·限制性内切酶产物的回收 | 第37-38页 |
| ·载体DNA 的限制性内切酶消化、电泳及回收 | 第38-39页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第38页 |
| ·载体 DNA 片段的电泳及回收 | 第38-39页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第39页 |
| ·连接体系的透析与转化 | 第39页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| ·限制性内切酶检测 | 第40页 |
| ·测序 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| 3 GT 基因启动子5’-部分缺失的转基因植株的获得及鉴定 | 第42-47页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42-43页 |
| ·化学试剂和生化试剂 | 第42页 |
| ·常用缓冲液和试剂的成分及配制 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备、转化及鉴定 | 第43页 |
| ·烟草叶盘外植体转化和转基因植株筛选 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·根癌农杆菌培养 | 第43-44页 |
| ·共培养 | 第44页 |
| ·诱导生芽 | 第44页 |
| ·诱导生根 | 第44页 |
| ·CTAB 法提取烟草总 DNA | 第44-45页 |
| ·转基因烟草植株PCR 检测 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-47页 |
| ·pCAMBIA1301 空载体和pGTPA~pGTPE 表达载体转化烟草植株的获得 | 第45-46页 |
| ·候选阳性转化植株PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| 4 GT 基因启动子的作用模式 | 第47-57页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·实验试剂 | 第47-48页 |
| ·实验仪器 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·转基因烟草水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)处理 | 第49页 |
| ·GUS 组织化学定位 | 第49页 |
| ·GUS 活性测定 | 第49-51页 |
| ·新鲜植物组织总蛋白的提取 | 第49页 |
| ·考马斯亮蓝法测定总蛋白含量 | 第49-50页 |
| ·GUS 酶活反应 | 第50页 |
| ·荧光定量分析 | 第50页 |
| ·酶活力计算 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-57页 |
| ·GUS 组织化学分析 | 第51-52页 |
| ·转化植株 GUS 酶活性的荧光定量分析 | 第52-57页 |
| ·不同长度启动子序列的活性分析 | 第52-53页 |
| ·水杨酸和茉莉酸甲酯诱导下不同长度启动子的活性分析 | 第53-57页 |
| 5 讨论 | 第57-60页 |
| ·GT 基因启动子序列分析 | 第57-58页 |
| ·启动子序列活性的荧光定量分析 | 第57页 |
| ·启动子序列活性的组织特异性分析 | 第57-58页 |
| ·外源基因在植物中表达和调控 | 第58页 |
| ·今后工作展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第72页 |
