| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-26页 |
| ·植物的抗逆性 | 第14-15页 |
| ·植物体内非生物逆境胁迫信号传递的分子机制研究现状 | 第15-17页 |
| ·植物体内非生物逆境胁迫信号传递的一般途径 | 第15-16页 |
| ·非生物逆境胁迫信号在植物体内传递的几个分支 | 第16-17页 |
| ·CIPK 类蛋白激酶的研究进展 | 第17-24页 |
| ·植物中CBL-CIPK 信号转导系统的组成及其结构特点 | 第17-20页 |
| ·CBL-CIPK 信号途径在盐胁迫下转导的分子调控机制 | 第20-22页 |
| ·CBL-CIPK 信号途径和ABA 信号途径交叉响应的分子调控机理 | 第22-23页 |
| ·CBL-CIPK 信号途径在干旱和低钾胁迫下转导的分子调控机制 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·试验材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第26页 |
| ·菌株及载体 | 第26页 |
| ·酶、试剂盒、生化试剂、培养基等 | 第26-27页 |
| ·仪器与设备 | 第27页 |
| ·PCR 引物 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-44页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第27-30页 |
| ·CTAB 法提取RNA | 第27-28页 |
| ·改良热硼酸法提取苹果果实RNA | 第28-29页 |
| ·Trizol 试剂盒提总RNA | 第29-30页 |
| ·总RNA 含量与纯度检测 | 第30页 |
| ·植物RNA 的纯化（除DNA）方法 | 第30-31页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第31页 |
| ·cDNA 末端加尾 | 第31-32页 |
| ·植物基因组DNA 的提取及纯化 | 第32-33页 |
| ·小量CTAB 法提取植物基因组DNA | 第32页 |
| ·植物基因组DNA 的纯化 | 第32-33页 |
| ·基因组DNA 含量与纯度检测 | 第33页 |
| ·基因克隆 | 第33-34页 |
| ·PCR 扩增体系 | 第33页 |
| ·MdCIPK6 基因全长序列的扩增 | 第33-34页 |
| ·目的片段的回收 | 第34页 |
| ·连接反应 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 和GV3101 感受态细胞的制备与转化 | 第36-37页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第36-37页 |
| ·MdCIPK6 基因表达载体的构建 | 第37页 |
| ·MdCIPK6 基因正义表达载体的构建 | 第37页 |
| ·点突变正义表达载体MdCIPK6T175D 的构建 | 第37页 |
| ·MdCIPK6 基因反义义表达载体的构建 | 第37页 |
| ·酵母双杂交试验 | 第37-40页 |
| ·转基因植物材料的获得 | 第40-42页 |
| ·农杆菌介导的苹果转化 | 第40-41页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第41-42页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化使用花序侵染法 | 第41-42页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第42页 |
| ·农杆菌介导的番茄转化 | 第42页 |
| ·转基因植株的生物学鉴定分析 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的基因组DNA 鉴定 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的RT-PCR | 第43页 |
| ·相关生理指标测定 | 第43-44页 |
| ·相对含水量的测定 | 第43页 |
| ·Na+离子含量测定 | 第43页 |
| ·相对电导率测定 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-66页 |
| ·MdCIPK6 基因全长cDNA 的分子克隆和序列分析 | 第44-47页 |
| ·MdCIPK6 基因的片段克隆、RACE 扩增和全长cDNA 序列分离 | 第44页 |
| ·MdCIPK6 蛋白的氨基酸序列分析 | 第44-47页 |
| ·MdCIPK6 基因的特异性表达分析 | 第47-48页 |
| ·MdCIPK6 基因在不同苹果组织和器官中的表达 | 第47页 |
| ·MdCIPK6 基因表达对逆境胁迫, 外源激素和钙离子的响应 | 第47-48页 |
| ·试验过程中相关载体的构建 | 第48-51页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·正义载体表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·反义载体表达载体的构建 | 第49页 |
| ·MdCIPK6T175D 定点突变序列分析及表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·酵母双杂交载体构建 | 第50-51页 |
| ·酵母双杂交和sos2 突变体表性恢复试验 | 第51-53页 |
| ·酵母双杂交结果和分析 | 第51页 |
| ·sos2 突变体表性恢复试验结果和分析 | 第51-53页 |
| ·过量表达MdCIPK6 对拟南芥抗逆性影响的结果和分析 | 第53-55页 |
| ·过量表达MdCIPK6 的转基因拟南芥株系的筛选与鉴定 | 第53-54页 |
| ·转基因拟南芥株系的抗逆性表型鉴定 | 第54-55页 |
| ·过量表达MdCIPK6 转基因苹果的抗逆性影响试验 | 第55-58页 |
| ·过量表达MdCIPK6 的转基因苹果株系的筛选与鉴定 | 第55-56页 |
| ·过量表达转基因株系的抗逆性表型鉴定 | 第56-58页 |
| ·MdCIPK6 在番茄中的转基因功能鉴定 | 第58-66页 |
| ·过量表达MdCIPK6 的转基因番茄株系的筛选与鉴定 | 第58页 |
| ·MdCIPK6 转基因番茄的萌发对NaCl 和ABA 的敏感性分析 | 第58-60页 |
| ·MdCIPK6 基因过量表达影响番茄幼苗对 ABA 和 IAA 的敏感性 | 第60-61页 |
| ·转基因番茄逆境胁迫响应分析 | 第61-63页 |
| ·幼苗时期,转基因番茄对高盐,干旱和低温逆境分析 | 第61-62页 |
| ·成苗时期,盆栽转基因番茄高盐,干旱和低温逆境分析 | 第62-63页 |
| ·MdCIPK6 提高转基因番茄非生物胁迫抗逆性的机理 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表和形成的学术论文 | 第82-83页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第83页 |
