| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-17页 |
| ·脂联素的结构及生化特征 | 第8-11页 |
| ·脂联素的发现及命名 | 第8页 |
| ·脂联素的结构特征 | 第8-9页 |
| ·脂联素多聚体 | 第9-10页 |
| ·脂联素的化学修饰 | 第10-11页 |
| ·脂联素受体情况 | 第11-13页 |
| ·黄体酮和脂联素受体家族 | 第12页 |
| ·脂联素受体的作用机制 | 第12-13页 |
| ·AdipoR1在肝脏里提高AMPK | 第12-13页 |
| ·AdipoR2在肝脏中增加PPARa靶基因 | 第13页 |
| ·脂联素的生物学及临床作用 | 第13-16页 |
| ·脂联素与2型糖尿病 | 第14-15页 |
| ·脂联素对心血管的影响 | 第15-16页 |
| ·研究内容、目的及意义 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第16页 |
| ·研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-35页 |
| ·实验材料 | 第17-22页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·质粒 | 第17-19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·主要溶液 | 第19-20页 |
| ·主要培养基 | 第20-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-35页 |
| ·编码序列的获得及克隆 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态的制备 | 第25页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌DH5α及其鉴定 | 第25-26页 |
| ·表达体系的建立及表达 | 第26-27页 |
| ·原核表达体系的建立 | 第26页 |
| ·pET重组子分析及测序 | 第26-27页 |
| ·重组型BL21(DE3)的表达 | 第27页 |
| ·真核表达体系建立及表达 | 第27-30页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-gAg的线性化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pPIC9K-His-gAg的纯化回收 | 第28页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及电击转化 | 第28-29页 |
| ·筛选遗传霉素抗性转化子 | 第29页 |
| ·酵母重组子PCR鉴定及测序分析 | 第29-30页 |
| ·重组型毕赤酵母GS115的分泌表达 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE分析及Western杂交检测 | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE分离蛋白 | 第30-31页 |
| ·转膜 | 第31页 |
| ·免疫反应 | 第31-32页 |
| ·化学发光,显影,定影 | 第32页 |
| ·His-gAd的分离纯化 | 第32-34页 |
| ·原核体系表达后的预处理 | 第32-33页 |
| ·真核体系表达后的预处理 | 第33页 |
| ·His-Binding-resin纯化柱的分离纯化gAd | 第33-34页 |
| ·蛋白浓度的测定(Bradford法) | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-45页 |
| ·编码序列的获得及克隆 | 第35-36页 |
| ·重组载体的鉴定分析 | 第36-37页 |
| ·重组载体的构建流程 | 第36页 |
| ·重组载体转DH5α后PCR初步鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·表达菌株的转化结果及分析 | 第37-41页 |
| ·毕赤酵母转化子的遗传霉素筛选 | 第37-38页 |
| ·重组表达菌株的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·测序结果 | 第39-41页 |
| ·原核重组菌株测序后比对结果 | 第39-40页 |
| ·真核重组菌株测序后比对结果 | 第40-41页 |
| ·目的蛋白的诱导表达分析 | 第41-43页 |
| ·原真核表达后的SDS-PAGE初步分析 | 第41-42页 |
| ·Western杂交分析结果 | 第42-43页 |
| ·His-Binding-resin纯化柱分离纯化后蛋白电泳结果 | 第43页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第43-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-48页 |
| ·关于重组蛋白 | 第45-46页 |
| ·人球形脂联素蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的诱导表达 | 第46页 |
| ·人球形脂联素蛋白在毕赤酵母中的诱导表达 | 第46-48页 |
| 第五章 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
