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转基因调控OsGBSS Ⅱ和OsPull基因表达对稻米淀粉品质影响的研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
符号说明第10-12页
1 前言第12-19页
   ·植物淀粉合成概述第13页
   ·植物淀粉合成中的关键酶第13-14页
   ·GBSSⅡ的研究进展第14-15页
   ·DBE 的分类第15页
   ·PULL 的研究进展第15-17页
   ·RNA 干扰机制及其应用第17-18页
   ·本研究的主要目的第18-19页
2 材料与方法第19-29页
   ·实验材料第19页
     ·供试水稻品种第19页
     ·菌株及双元载体第19页
   ·质粒DNA 的提取、纯化第19页
   ·培养基第19页
   ·水稻愈伤组织的诱导及培养第19-20页
   ·根癌农杆菌的培养及其介导的水稻共转化第20-22页
     ·根癌农杆菌的培养第20-22页
     ·水稻受体材料的侵染及其与根癌农杆菌的共培养第22页
     ·抗性愈伤组织的筛选及植株再生第22页
   ·转基因水稻植株中潮霉素抗性的检测第22页
   ·PCR 分析第22-23页
     ·水稻植株叶片总DNA 的提取第22页
     ·PCR 扩增第22-23页
   ·Southern 杂交分析第23-24页
     ·大量总DNA 的提取第23页
     ·地高辛标记的DNA 探针的制备第23-24页
     ·Southern 杂交分析第24页
   ·Northern 杂交分析第24-25页
     ·水稻胚乳总RNA 的提取第24页
     ·水稻叶片总RNA 的提取第24-25页
     ·Northern 杂交分析第25页
   ·RT-PCR 分析第25页
   ·水稻成熟种子中GBSS 蛋白的SDS-PAGE 分析第25-26页
     ·GBSS 蛋白的提取第25-26页
     ·SDS-PAGE第26页
   ·普鲁兰酶活性的测定第26页
     ·粗酶液的提取第26页
     ·活性测定第26页
   ·水稻成熟种子中直链淀粉含量(AC)的测定第26-27页
     ·样品前处理第26-27页
     ·大量测定第27页
     ·单粒测定第27页
   ·胶稠度和糊化温度的测定第27页
   ·淀粉粘滞性谱(RVA)分析第27-29页
3 结果与分析第29-56页
   ·水稻种子中过量表达OsGBSSⅡ基因对稻米品质的影响第29-37页
     ·转基因水稻植株的获得第29-30页
     ·转基因水稻植株的分子鉴定第30-32页
       ·PCR 鉴定第30-31页
       ·Southern 杂交分析第31-32页
     ·转基因水稻中OsGBSSⅡ基因的表达分析第32-33页
       ·Northern 杂交分析第32-33页
       ·RT-PCR 分析第33页
     ·转基因水稻成熟种子中GBSS 蛋白表达量分析第33-35页
     ·转基因水稻成熟种子的品质表现第35-37页
       ·T_1 代转基因水稻成熟种子中的直链淀粉含量第35页
       ·部分T_2 代转基因水稻成熟稻米的理化品质第35-36页
       ·转基因水稻成熟种子淀粉的RVA 谱第36-37页
   ·RNA 干扰OsGBSSⅡ基因表达对稻米品质的影响第37-46页
     ·转基因水稻植株的获得第37-38页
     ·转基因水稻植株的分子鉴定第38-40页
       ·PCR 鉴定第38-39页
       ·Southern 杂交分析第39-40页
     ·转基因水稻中OsGBSSⅡ基因的表达分析第40-41页
       ·Northern 杂交分析第40页
       ·RT-PCR 分析第40-41页
     ·转基因水稻成熟种子的品质表现第41-46页
       ·T_1 代转基因水稻成熟种子中的直链淀粉含量第41-43页
       ·部分T_2 代转基因水稻成熟稻米的理化品质第43-44页
       ·转基因水稻成熟种子淀粉的RVA 谱第44-46页
   ·RNA 干扰OsPull 基因表达对稻米品质的影响第46-56页
     ·转基因水稻植株的获得第46页
     ·转基因水稻植株的分子鉴定第46-48页
       ·PCR 鉴定第46页
       ·Southern 杂交分析第46-48页
     ·转基因水稻中OsPull 基因的表达分析第48-50页
       ·Northern 杂交分析第48-49页
       ·RT-PCR 分析第49-50页
     ·普鲁兰酶活性的测定第50-51页
     ·转基因水稻成熟种子的品质表现第51-56页
       ·T_1 代转基因水稻成熟种子中的直链淀粉含量第51-53页
       ·部分T_2 代转基因水稻成熟稻米的理化品质第53-54页
       ·转基因水稻成熟种子淀粉的RVA 谱第54-56页
4 小结与讨论第56-60页
   ·研究小结第56页
   ·有关水稻OsGBSSⅡ基因的功能第56-58页
     ·OsGBSSⅡ基因过量表达结构第56-57页
     ·OsGBSSⅡ基因RNA 干扰结构第57-58页
   ·有关水稻OsPull 基因的功能第58-59页
   ·研究展望第59-60页
参考文献第60-65页
附录第65-67页
致谢第67页

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