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新城疫病毒地方分离株生物学特性的鉴定及疫苗候选株筛选的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-12页
1. 前言第12-27页
   ·NDV 的生物学特性第12-14页
     ·NDV 的结构及形态特性第12页
     ·血凝特性(Hemagglutinin,HA)第12页
     ·神经氨酸酶活性(Neuraminidase,NA)第12-13页
     ·细胞融合与溶血活性第13页
     ·抗肿瘤和抗衰老第13页
     ·NDV 抗原性第13页
     ·NDV 的复制第13-14页
   ·NDV 基因组结构及其功能第14-19页
     ·NDV 基因组结构第14-15页
     ·NDV 结构蛋白及功能第15-19页
       ·核衣壳蛋白(NP)第15页
       ·磷蛋白(P)第15-16页
       ·基质蛋白(M)第16页
       ·RNA 依赖性RNA 聚合酶(L)第16-17页
       ·血凝素-神经氨酸酶(HN)第17-18页
       ·融合蛋白(F)第18-19页
   ·NDV 致病性的分子基础第19-21页
   ·ND 的流行病学及分类第21-23页
     ·ND 的流行病学第21页
     ·ND 的一般分类第21-22页
     ·ND 流行病学与基因分型第22-23页
       ·利用单克隆抗体技术进行毒株的分型第22页
       ·利用 F 基因进行毒株的分型第22-23页
   ·ND 的免疫第23-24页
     ·细胞免疫第23页
     ·体液免疫第23页
     ·局部免疫第23-24页
     ·被动免疫第24页
   ·ND 检测与诊断技术第24-26页
     ·病毒的分离与鉴定第24页
     ·血清学检测技术第24-25页
     ·分子生物学诊断技术第25-26页
   ·ND 的防制第26-27页
   ·本试验研究的目的及意义第27页
2 材料与方法第27-36页
   ·毒株第27页
   ·SPF 鸡和SPF 鸡胚第27-28页
   ·主要试剂和仪器第28页
   ·病毒的克隆纯化第28页
   ·NDV 分离株F 基因的克隆第28-31页
     ·引物设计与合成第28页
     ·病毒 RNA 提取、反转录及 PCR 扩增第28-29页
     ·RT-PCR 产物的回收第29页
     ·回收产物连接第29页
     ·DH5α感受态细胞的制备第29-30页
     ·连接产物转化第30页
     ·含目的基因质粒的扩增第30页
     ·重组质粒的提取与鉴定第30-31页
       ·重组质粒的提取第30-31页
       ·重组质粒的鉴定第31页
     ·序列测定及分析第31页
   ·分离株及 LASOTA、I 系、CLONE30、FE的交互免疫性的研究第31-33页
     ·抗原的制备及甲醛灭活对血凝性的影响第31页
     ·疫苗的制备第31-32页
     ·高免血清的制备第32页
     ·1%红细胞悬液的制备第32页
     ·各毒株相互之间交叉 HI 试验第32-33页
     ·各毒株相互之间交叉病毒中和试验第33页
       ·鸡胚原代成纤维细胞(CEF)的制备第33页
       ·各毒株 TCID_(50)的测定第33页
       ·各毒株相互之间交叉病毒中和价(PD_(50))的测定第33页
   ·NDV 疫苗候选株的生物学特性第33-36页
     ·鸡胚最小致死量的平均致死时间(MDT)的测定第34页
     ·1 日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)的测定第34页
     ·6 周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)的测定第34-35页
     ·NDV 疫苗候选株 HN 基因的克隆第35-36页
       ·引物设计第35页
       ·病毒 RNA 提取、反转录及 PCR 扩增第35页
       ·RT-PCR 产物的回收、连接、转化及重组质粒的提取第35页
       ·重组质粒的鉴定第35页
       ·序列测定及分析第35-36页
   ·NDV 疫苗候选株的免疫保护试验的研究第36页
3 结果第36-49页
   ·F 基因的RT-PCR 扩增结果第36页
   ·重组质粒的酶切鉴定结果第36-38页
   ·分离株 F 基因片段序列及同源性比较结果第38-39页
   ·甲醛灭活对血凝性的影响结果第39-41页
   ·各毒株相互之间交叉HI 价测定结果第41页
   ·各毒株相互之间的 HI 相关系数 R 的计算结果第41页
   ·各毒株 TCID_(50)的测定值结果第41-42页
   ·各毒株相互之间交叉病毒中和价(PD_(50))的测定结果第42页
   ·各毒株相互之间的PD_(50)相关系数 R 的计算结果第42-43页
   ·NDV 疫苗候选株的 MDT、ICPI 和IVPI 测定结果第43-45页
   ·疫苗候选株 H838 和 F1 的 HN 基因的 RT-PCR 扩增结果第45-46页
   ·疫苗候选株 H838 和 F1 的 HN 重组质粒的酶切鉴定结果第46页
   ·疫苗候选株 H838 和 F1 的 HN 基因片段序列及同源性比较结果第46-47页
   ·NDV 疫苗候选株的免疫保护试验结果第47-49页
4 讨论第49-54页
   ·F 基因生物学特性第49-51页
   ·交互免疫性的研究第51页
   ·疫苗候选株的生物学特性第51-52页
   ·疫苗候选株的应用前景第52-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-64页
附录第64-70页
作者简介第70页

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