| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-14页 |
| 文献综述 | 第14-36页 |
| 1 作为疫苗和疫苗载体的胞内菌-沙门氏菌 | 第14-25页 |
| ·沙门氏菌侵入机体途径 | 第15-17页 |
| ·沙门氏菌通过M细胞进入机体 | 第15-16页 |
| ·通过树突细胞(DCs)直接摄取的非上皮细胞途径 | 第16-17页 |
| ·重组减毒沙门氏菌诱发宿主机体免疫应答的机制 | 第17-19页 |
| ·机体对胞内菌入侵反应及胞内菌对机体细胞防御机制的逃避 | 第17-18页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的抗原呈递及免疫应答的可能机理 | 第18-19页 |
| ·沙门氏菌的基因工程减毒 | 第19-21页 |
| ·减毒的沙门氏菌中表达异源抗原的方式 | 第21-22页 |
| ·减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的应用及前景 | 第22-24页 |
| ·减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的优势 | 第24-25页 |
| ·以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗的潜在威胁 | 第25页 |
| 2 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 | 第25-36页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行病学及危害 | 第26-28页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的发生和传播 | 第26-27页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行现状 | 第27页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎危害 | 第27-28页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎致病机理 | 第28-29页 |
| ·APP的主要毒力因子 | 第29-30页 |
| ·Apx毒素的分子结构 | 第30-32页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎疫苗研究进展 | 第32-36页 |
| ·全细菌灭活疫苗 | 第32页 |
| ·亚单位疫苗 | 第32-33页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第33-34页 |
| ·胸膜肺炎Ghosts疫苗 | 第34页 |
| ·载体运送的APP核酸疫苗的探索性研究 | 第34-36页 |
| 第一章 含EGFP的双启动子表达载体pEGFPPtrcR的构建及在猪霍乱沙门氏菌C500和Vero细胞中的表达 | 第36-62页 |
| 1 材料与方法 | 第36-48页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第36-37页 |
| ·酶和其它试剂 | 第37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌C500标准株生长特性、生化特性、药敏特性及血清学鉴定 | 第37-38页 |
| ·C500标准株的培养特性及形态结构观察 | 第37-38页 |
| ·C500标准株的生化鉴定 | 第38页 |
| ·C500标准株的药敏实验 | 第38页 |
| ·血清型鉴定 | 第38页 |
| ·双启动子表达载体pEGFPPtrcR的构建 | 第38-45页 |
| ·重组质粒pMD18-T-rrnBT1T2的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒pEGFP-rrnBT1T2的构建 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR的构建 | 第43-45页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR转化猪霍乱沙门氏菌C500株 | 第45-46页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌C500株感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·转化感受态沙门氏菌C500株 | 第45-46页 |
| ·转化菌的筛选、增殖、保种与鉴定 | 第46页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR生长特性、生化特性、药敏特性及血清学鉴定 | 第46页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR中质粒的体外遗传稳定性实验 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR在原核细胞猪霍乱沙门氏菌C500中的表达 | 第47页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR的荧光检测 | 第47页 |
| ·双启动子表达载体pEGFPPtrcR的表达及表达产物的鉴定 | 第47页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR在真核Vero细胞中的表达 | 第47-48页 |
| ·pEGFPPtrcR质粒DNA的提取 | 第47页 |
| ·重组pEGFPPtrcR质粒DNA的转染Vero细胞 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR在Vero细胞中表达绿色荧光的检测 | 第48页 |
| 2 实验结果与分析 | 第48-56页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌C500标准株生长特性、生化特性、药敏特性及血清学鉴定 | 第48-49页 |
| ·C500标准株的培养特性及形态结构观察 | 第48页 |
| ·C500标准株的生化鉴定 | 第48-49页 |
| ·C500标准株的药敏实验 | 第49页 |
| ·C500标准株的血清型鉴定 | 第49页 |
| ·双启动子表达载体pEGFPPtrcR的构建 | 第49-52页 |
| ·重组质粒pMD18-T-rrnBT1T2的构建 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pEGFP-rrnBT1T2的鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR的构建 | 第51-52页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR的鉴定 | 第52-53页 |
| ·菌液PCR鉴定及EGFP检测引物特异性鉴定 | 第52页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR的质粒酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR生长特性、生化特性、药敏特性及血清学鉴定 | 第53-54页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR中质粒的体外遗传稳定性 | 第54页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR在原核细胞C500中表达的检测 | 第54-56页 |
| ·工程菌C500/pEGFPPtrcR的荧光检测 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR在C500中的表达蛋白的SDS-PAGE | 第55-56页 |
| ·重组质粒pEGFPPtrcR在真核Vero细胞中的表达检测 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 第二章 含猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的apxⅡA基因的双启动子表达载体pEPR-apxⅡA的构建 | 第62-91页 |
| 1 材料与方法 | 第63-69页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第63页 |
| ·酶和其它试剂 | 第63页 |
| ·仪器设备 | 第63页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APP基因组DNA的提取 | 第63-64页 |
| ·APP细菌的培养 | 第63-64页 |
| ·APP基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·apxⅡA基因的扩增 | 第64-65页 |
| ·apxⅡA扩增产物的电泳检测 | 第65页 |
| ·含APP的apxⅡA基因的双启动子表达载体pEPR-apxⅡA的构建 | 第65-67页 |
| ·apxⅡA扩增产物的纯化 | 第65-66页 |
| ·apxⅡA基因的酶切回收 | 第66页 |
| ·载体pEGFPPtrcR的酶切回收 | 第66页 |
| ·目的片段apxⅡA和载体pEGFPPtrcR的连接 | 第66页 |
| ·转化宿主菌E.coli DH5a | 第66页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA的鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA转化猪霍乱沙门氏菌C500株 | 第67页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌C500株感受态细胞的制备 | 第67页 |
| ·转化感受态沙门氏菌C500株 | 第67页 |
| ·转化菌的筛选、增殖、保种与鉴定 | 第67页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA生长特性、生化特性、药敏特性及血清学鉴定 | 第67-68页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA中质粒的遗传稳定性实验 | 第68页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA在原核细胞猪霍乱沙门氏菌C500中的表达 | 第68页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA的荧光检测 | 第68页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA的表达及表达产物的鉴定 | 第68页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA在真核Vero细胞中的表达 | 第68-69页 |
| ·pEPR-apxⅡA质粒DNA的提取 | 第68页 |
| ·重组pEPR-apxⅡA质粒DNA的转染Vero细胞 | 第68-69页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA在Vero细胞中表达绿色荧光的检测 | 第69页 |
| 2 实验结果与分析 | 第69-85页 |
| ·apxⅡA基因的扩增 | 第69-70页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA的鉴定 | 第70页 |
| ·apxⅡA基因的序列分析 | 第70-80页 |
| ·apxⅡA基因的氨基酸序列分析 | 第80-81页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA的鉴定 | 第81-82页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA生长特性、生化特性、药敏特性及血清学鉴定 | 第82-83页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA中质粒的遗传稳定性 | 第83页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA在原核细胞猪霍乱沙门氏菌C500中的表达 | 第83-84页 |
| ·工程菌C500/pEPR-apxⅡA的荧光检测 | 第83页 |
| ·重组质粒pEPR-apxⅡA在C500中的表达蛋白的SDS-PAGE | 第83-84页 |
| ·重组质粒pEPR—apxⅡA,在Vero细胞中的表达 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-89页 |
| 4 结论 | 第89-91页 |
| 第三章 含原核启动子和绿色荧光蛋白基因的重组转移载体p18BE-pTER的构建 | 第91-109页 |
| 1 材料与方法 | 第91-101页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第91-92页 |
| ·酶和其它试剂 | 第92页 |
| ·仪器设备 | 第92页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌C500基因组DNA的提取 | 第92页 |
| ·invB基因和invE基因的PRC扩增 | 第92-94页 |
| ·invB基因和invE基因扩增产物的电泳检测和回收 | 第94页 |
| ·invB基因和invE基因扩增产物的T载体连接和转化以及筛选 | 第94-95页 |
| ·重组质粒T-invB和T-invE的鉴定 | 第95页 |
| ·重组质粒T-invB的酶切鉴定 | 第95页 |
| ·重组质粒T-invE的酶切鉴定 | 第95页 |
| ·invB和invE基因的序列测定 | 第95页 |
| ·重组质粒pUC18-E的构建 | 第95-98页 |
| ·invB和invE基因的酶切回收 | 第95-96页 |
| ·克隆载体pUC18的鉴定和制备 | 第96页 |
| ·重组质粒pUC18-invE的构建 | 第96页 |
| ·重组质粒pUC18-invE的鉴定 | 第96-97页 |
| ·pUC18-invE载体的补平 | 第97-98页 |
| ·重组质粒pUC18-BE的构建 | 第98-99页 |
| ·重组质粒pUC18-E的酶切回收 | 第98页 |
| ·重组质粒pUC18-invBE的构建 | 第98页 |
| ·重组质粒pUC18-invBE的鉴定 | 第98页 |
| ·重组质粒pUC18-invBE的酶切回收 | 第98-99页 |
| ·pUC18-invBE载体的补平连接转化筛选 | 第99页 |
| ·pUC18-BE的鉴定 | 第99页 |
| ·含原核启动子和绿色荧光蛋白基因的重组自杀载体p18BE-pTER的构建 | 第99-101页 |
| ·pTER的PCR扩增和酶切回收 | 第99-100页 |
| ·pUC18-BE载体的酶切和去磷酸化反应以及回收 | 第100页 |
| ·载体与目的片段的连接和转化 | 第100页 |
| ·重组转移载体p18BE-pTER X的鉴定 | 第100页 |
| ·重组转移载体p18BE-pTER X中pTER的方向性鉴定 | 第100-101页 |
| 2 实验结果 | 第101-105页 |
| ·invB基因和invE基因的扩增、克隆与序列测定 | 第101页 |
| ·重组质粒pUC18-invE的鉴定 | 第101-102页 |
| ·重组质粒pUC18-E的鉴定 | 第102-103页 |
| ·重组质粒DUC18-invBE的鉴定 | 第103页 |
| ·重组质粒DUC18-BE的鉴定 | 第103页 |
| ·pTER的PCR产物的鉴定 | 第103页 |
| ·重组转移载体p18BE-pTER X的鉴定 | 第103-104页 |
| ·重组转移载体p18BE-pTER X中pTER的方向性鉴定 | 第104-105页 |
| 3 讨论 | 第105-108页 |
| 4 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第119页 |
