| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-8页 |
| 主要英文缩写词表 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-20页 |
| 一、文献综述 | 第9-19页 |
| (一) 视网膜光损伤病理生理机制 | 第9-11页 |
| (二) 光损伤与 RPE 细胞 | 第11-12页 |
| (三) RPE 细胞凋亡的相关基因 | 第12-14页 |
| (四) RPE 细胞凋亡与玻璃体视网膜疾病 | 第14-15页 |
| (五) RPE 细胞凋亡相关疾病的治疗现状 | 第15-17页 |
| (六) s-lap 基因与光损伤诱导的 RPE 细胞凋亡 | 第17-19页 |
| 二、本文的研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-28页 |
| 一、实验材料 | 第20-21页 |
| (一) 菌株、细胞及质粒 | 第20页 |
| (二) 主要生化及分子生物学试剂 | 第20页 |
| (三) 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 二、实验方法 | 第21-28页 |
| (一) s-lap 基因真核表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 1. s-lap基因序列编码区的克隆 | 第21-22页 |
| 2. pcDNA3.1/s-lap/GFP 重组质粒的构建 | 第22页 |
| (二) s-lap/GFP 融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达与定位研究 | 第22-24页 |
| 1. 重组质粒的瞬时转染与s-lap/GFP 融合蛋白的细胞内定位观察 | 第22-23页 |
| 2. 转染后细胞裂解涂片观察 | 第23-24页 |
| (三) s-lap 与细胞凋亡相关性研究 | 第24页 |
| 1. 转染后细胞基因组检测 | 第24页 |
| 2. 转染后细胞周期检测 | 第24页 |
| (四) s-lap 基因的原核表达与s-lap 蛋白的纯化 | 第24-26页 |
| 1. PHB/s-lap原核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2. PHB/s-lap重组质粒的诱导表达 | 第25页 |
| 3. pET-28a(+)/s-lap 原核表达载体的构建 | 第25页 |
| 4. pET-28a(+)/s-lap 重组质粒的诱导表达 | 第25页 |
| 5. s-lap蛋白的大量表达与纯化 | 第25-26页 |
| 6. s-lap蛋白的浓缩与保存 | 第26页 |
| (五) s-lap 蛋白小鼠多克隆抗体制备 | 第26-28页 |
| 1. BALB/c 小鼠的免疫 | 第26页 |
| 2. 小鼠尾血的采集 | 第26-27页 |
| 3. 小鼠尾血抗体效价间接 ELISA 方法检测 | 第27页 |
| 4. 小鼠尾血抗体的 Western Blotting 分析 | 第27页 |
| 5. 小鼠s-lap 抗血清的收集和保存 | 第27-28页 |
| 实验结果 | 第28-46页 |
| 一、s-lap 基因的真核表达、细胞内定位及对293T 细胞周期的影响 | 第28-34页 |
| (一) s-lap 基因的真核表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 1. s-lap基因序列编码区的克隆 | 第28-29页 |
| 2. pcDNA3.1/s-lap/GFP重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| (二) s-lap/GFP 融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达及定位 | 第31-33页 |
| (三) s-lap/GFP 融合蛋白对293T 细胞凋亡的影响 | 第33页 |
| (四) s-lap/GFP 融合蛋白对293T 细胞周期的影响 | 第33-34页 |
| 二、s-lap 基因的原核表达及s-lap 蛋白多克隆抗体的制备 | 第34-46页 |
| (一) s-lap 蛋白的原核表达 | 第34-41页 |
| 1. pMD18-T/s-lap克隆质粒的构建 | 第34-35页 |
| 2. PHB/s-lap原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3. PHB/s-lap重组质粒的诱导表达 | 第36-37页 |
| 4. 不同诱导表达时间对目的蛋白表达水平的影响 | 第37-38页 |
| 5. PHB/s-lap 重组质粒表达s-lap 蛋白形式鉴定 | 第38页 |
| 6. pET-28a(+)/s-lap 原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 7. pET-28a(+)/s-lap 重组质粒的诱导表达 | 第39-40页 |
| 8. 诱导表达时间的选择 | 第40-41页 |
| 9. pET-28a(+)/s-lap 表达s-lap 蛋白表达形式的鉴定 | 第41页 |
| (二) s-lap 融合蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| 1. s-lap 融合蛋白的亲和层析纯化 | 第41-42页 |
| 2. s-lap 融合蛋白的定量 | 第42-43页 |
| 3. s-lap 融合蛋白的浓缩 | 第43页 |
| (三) s-lap 融合蛋白抗体的制备及鉴定 | 第43-46页 |
| 1. s-lap 融合蛋白抗体效价的 ELISA 检测 | 第43-44页 |
| 2. s-lap 融合蛋白抗体的 Western Blotting 分析 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 一、s-lap 基因序列分析及其编码区的克隆 | 第46页 |
| 二、s-lap/GFP 融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达及定位 | 第46-47页 |
| 三、s-lap 基因与细胞凋亡的关系 | 第47页 |
| 四、s-lap 蛋白的原核表达及纯化 | 第47-48页 |
| 五、s-lap 蛋白抗体制备 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第58页 |
