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小麦细胞壁蛋白Expansin基因的分离及其功能分析

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-13页
1. 前言第13-33页
   ·EXPANSIN 的发现第13-14页
   ·EXPANSIN 的结构第14-15页
   ·EXPANSIN 伸展细胞壁的机理第15-18页
   ·EXPANSIN 的基因家族第18-20页
   ·EXPANSIN 的表达特性及表达调控第20-24页
     ·膨胀素活性具有高度的专一性第20-22页
     ·表达调控第22-24页
   ·EXPANSIN 的功能分析第24-31页
       ·E XPANSIN 对细胞组织生长的作用第25-26页
       ·E XPANSIN 对种子萌发的作用第26页
       ·E XPANSIN 对根毛起始、根系生长延长的作用第26页
       ·E XPANSIN 对叶子生长发育的作用第26-27页
       ·E XPANSIN 对叶柄脱落的作用第27页
       ·E XPANSIN 对软化果实的作用第27-29页
       ·E XPANSIN 对花粉管的作用第29-30页
     ·成熟叶片中的EXPANSIN第30页
       ·E XPANSIN 与植物干旱胁迫反应第30-31页
   ·展望第31-32页
   ·本研究的目的意义第32-33页
2. 材料与方法第33-53页
   ·实验材料第33-35页
     ·植物材料及生长条件第33页
     ·菌株与质粒第33页
     ·酶及生化试剂第33页
     ·PCR 引物第33-35页
   ·实验方法第35-53页
     ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA第35-36页
     ·甲醛变性胶电泳第36-37页
     ·反转录CDNA 第一链的合成第37页
     ·CDNA 纯化(用于5′RACE)第37-38页
     ·对CDNA 进行末端加尾(用于5′RACE)第38页
     ·PCR 扩增第38页
     ·连接反应第38-39页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第39-40页
     ·碱法小量质粒DNA 的提取第40-41页
     ·DNA 序列测定第41页
     ·目的基因TRI-EXP81 的分离第41页
     ·TRI-EXP81 基因正义表达载体的构建(如图2-2.所示)第41-42页
     ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备第42-43页
     ·利用农杆菌介导转化烟草(参考HORSCH ET AL.,1985)第43-44页
     ·转基因烟草植株的PCR 检测第44-45页
     ·RT-PCR 检测TRI-EXP81 的表达第45页
     ·EXPANSIN 抗体的制备和效价的测定第45-49页
     ·酵母表达载体的构建与转化第49-53页
3 结果与分析第53-76页
   ·小麦TRI-EXP81 基因全长CDNA 的克隆及表达特征分析第53-63页
     ·TRI-EXP81 基因的分离第53-55页
     ·TRI-EXP81 基因序列分析第55-58页
     ·TRI-EXP81 基因在小麦中的时空表达特性分析第58-59页
     ·TRI-EXP81 基因转录表达对干旱胁迫的反应第59-63页
   ·TRI-EXP81 基因转化烟草及转基因烟草的生长和发育第63-72页
     ·烟草转化及转基因植株的鉴定第63-65页
     ·转基因烟草的性状表现第65-71页
     ·转基因烟草的抗旱性第71-72页
   ·TRI-EXP81 基因在E.COLI 中的表达及抗体制备第72-74页
     ·TRI-EXP81 基因在E.COLI 中的表达第72-74页
     ·抗血清的制备和效价测定第74页
   ·TRI-EXP81 基因转化酵母第74-76页
4 讨论第76-84页
   ·小麦膨胀素基因的克隆及特性分析第76页
   ·TRI-EXP81 基因表达与小麦胚芽鞘的生长第76-77页
   ·膨胀素与植物对干旱胁迫的适应第77-79页
   ·转小麦EXPANSIN 基因对烟草生长发育的影响第79-84页
     ·过量表达小麦TRI-EXP81 基因影响了转基因烟草的生长和发育第79-80页
     ·来源于单子叶植物的Β-EXPANSIN 明显影响了双子叶植物的生长发育过程第80-82页
     ·烟草中过量表达膨胀素在其它方面的功能第82-84页
5 主要结论第84-85页
参考文献第85-96页
附录第96-98页
致谢第98页

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