| 论文独创性声明 | 第1页 |
| 关于论文使用授权的声明 | 第2-3页 |
| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1. 组织和细胞培养的意义及发展概况 | 第13页 |
| 2. 幼胚培养研究意义 | 第13-15页 |
| ·克服杂种胚早期衰败 | 第14页 |
| ·突变体筛选 | 第14页 |
| ·用作转基因受体 | 第14-15页 |
| 3. 影响玉米幼胚培养的因素 | 第15-17页 |
| ·基因型对幼胚培养效果的影响 | 第15-16页 |
| ·培养基组成和培养条件对幼胚培养过程的影响 | 第16-17页 |
| 4. 组织培养遗传研究进展 | 第17-19页 |
| 5. 玉米幼胚培养胚性愈伤组织分化植株的研究进展 | 第19-21页 |
| ·愈伤组织分化性状的重要意义 | 第19-20页 |
| ·愈伤组织分化的表型研究现状 | 第20页 |
| ·愈伤组织分化的传统遗传学研究 | 第20-21页 |
| ·愈伤组织分化的分子标记研究 | 第21页 |
| 6. 利用 mRNA进行功能基因研究的重要性和必要性 | 第21-22页 |
| 7. 差异表达基因克隆的常见方法 | 第22-27页 |
| ·差异显示技术(DDRT-PCR) | 第22-23页 |
| ·代表性差异分析法(RDA) | 第23页 |
| ·基因芯片 | 第23-24页 |
| ·抑制性差减杂交(SSH) | 第24-27页 |
| ·SSH原理 | 第24-25页 |
| ·SSH技术的优点和缺点 | 第25-26页 |
| ·SSH在动物上的应用 | 第26页 |
| ·SSH在植物上的应用 | 第26-27页 |
| 8. 关于愈伤组织的基因克隆研究 | 第27-29页 |
| 9. 立题思想 | 第29-31页 |
| 第二章 玉米幼胚培养愈伤组织分化能力遗传分析 | 第31-42页 |
| 1. 实验方法与材料 | 第31-33页 |
| ·供试材料 | 第31页 |
| ·培养方法 | 第31页 |
| ·培养基及培养条件 | 第31-32页 |
| ·资料统计分析 | 第32-33页 |
| ·性状调查 | 第32页 |
| ·资料统计分析 | 第32-33页 |
| 2. 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·自交系绿苗分化数分析 | 第33-34页 |
| ·完全双列杂交组合绿苗分化数均值分析 | 第34-36页 |
| ·杂交组合绿苗分化数配合力分析 | 第36-39页 |
| ·杂交组合间绿苗分化数的差异显著性测验 | 第36-37页 |
| ·配合力方差分析 | 第37页 |
| ·配合力效应值及相关参数的估计及检验 | 第37-39页 |
| ·绿苗分化数的正反交分析 | 第39-40页 |
| ·用hayman法对双列杂交组合进行遗传模型和效应分析 | 第40-42页 |
| 第三章 玉米幼胚培养愈伤组织分化相关基因克隆 | 第42-77页 |
| 1. 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·供试材料 | 第42页 |
| ·培养方法 | 第42页 |
| ·培养基及培养条件 | 第42页 |
| ·Tester和 Driver材料选取 | 第42页 |
| ·RNA提取 | 第42-43页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第43页 |
| ·SSH | 第43页 |
| ·PCR产物纯化 | 第43页 |
| ·cDNA消减文库的构建 | 第43-44页 |
| ·质粒提取 | 第44页 |
| ·外源插入片段的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·外源插入片段的 PCR鉴定 | 第44页 |
| ·反Northern鉴定 | 第44页 |
| ·DNA测序与序列数据分析 | 第44-45页 |
| ·差异表达基因的 RT-PCR检验 | 第45页 |
| 2. 结果与分析 | 第45-71页 |
| ·玉米胚性愈伤组织分化 | 第45页 |
| ·RNA提取和检测 | 第45-46页 |
| ·mRNA纯化 | 第46页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第46-47页 |
| ·cDNA双链合成与 EcoRI酶切 | 第46页 |
| ·消减杂交与选择性 PCR | 第46-47页 |
| ·质粒 DNA提取 | 第47页 |
| ·文库插入片段检测 | 第47-48页 |
| ·酶切检测插入片段 | 第47页 |
| ·PCR检测插入片段 | 第47-48页 |
| ·文库的反向-Northern杂交筛选 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆测序和同源序列比对分析 | 第49页 |
| ·RT-PCR验证功能基因差异表达 | 第49-58页 |
| ·序列功能分析 | 第58-71页 |
| ·蛋白质合成和降解酶 | 第58-61页 |
| ·能量代谢酶 | 第61-62页 |
| ·糖代谢相关酶 | 第62-66页 |
| ·运输蛋白 | 第66-67页 |
| ·调节蛋白和酶 | 第67-69页 |
| ·其它功能 | 第69-71页 |
| 附图 | 第71-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-86页 |
| 1. 玉米幼胚培养胚性愈伤组织分化的遗传多样性 | 第77页 |
| 2. 亲本自身表现在亲本选择中的应用 | 第77页 |
| 3. 配合力分析在亲本选择中的应用 | 第77-78页 |
| 4. 遗传模型和效应在后代选择和亲本选择中的应用 | 第78-79页 |
| 5. 应用SSH技术结合反向Northtern 技术克隆玉米分化相关基因 | 第79-80页 |
| 6. 关于愈伤组织分化的形态建成 | 第80-81页 |
| 7. 愈伤组织分化过程中的核酸、蛋白质代谢 | 第81页 |
| 8. 愈伤组织分化过程中的糖代谢 | 第81-82页 |
| 9. 培养条件诱导的愈伤组织分化基因 | 第82-84页 |
| 10. 愈伤组织分化与逆境胁迫相关基因 | 第84-85页 |
| 11. 愈伤组织分化相关基因表达丰度及表达时期 | 第85-86页 |
| 第五章 结论 | 第86-87页 |
| 第六章 进一步研究计划 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附录1 总RNA的提取与检测 | 第112-113页 |
| 附录2 MRNA纯化 | 第113-115页 |
| 附录3 抑制消减杂交(SSH) | 第115-120页 |
| 附录4 二次PCR产物的纯化回收 | 第120-121页 |
| 附录5 消减文库的构建 | 第121-122页 |
| 附录6 质粒 DNA提取 | 第122-123页 |
| 附录7 反向NORTHERN鉴定 | 第123-126页 |
| 攻读学位期间发表论著 | 第126页 |
