| 前言 | 第1-11页 |
| 第一章 转基因植物生产轮状病毒疫苗研究进展 | 第11-18页 |
| 第二章 实验研究 | 第18-39页 |
| 实验一 VP4植物表达载体的构建 | 第18-27页 |
| 1 实验材料 | 第18页 |
| 1．1 菌株与质粒 | 第18页 |
| 1．2 主要试剂 | 第18页 |
| 1．3 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-24页 |
| 2．1 模板的制备 | 第18-19页 |
| 2．2 引物设计与合成 | 第19页 |
| 2．3 PCR反应及PCR产物的回收 | 第19-21页 |
| 2．4 扩增产物的克隆及转化 | 第21页 |
| 2．5 pT-VP4Ⅱ重组质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| 2．6 线性化pBI121载体的制备 | 第22页 |
| 2．7 线性化载体与VP4基因片段的连接 | 第22-23页 |
| 2．8 pBI-VP4重组质粒的鉴定 | 第23页 |
| 2．9 pBI-VP4重组质粒转化农杆菌感受态 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-27页 |
| 3．1 pT-VP4Ⅰ PCR扩增结果 | 第24页 |
| 3．2 重组质粒pT-VP4Ⅱ鉴定结果 | 第24-25页 |
| 3．3 重组质粒pBI-VP4鉴定结果 | 第25-26页 |
| 3．4 pBI-VP4／EHA105鉴定结果 | 第26-27页 |
| 实验二 VP7植物表达载体的构建 | 第27-32页 |
| 1 实验材料 | 第27页 |
| 1．1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 1．2 主要试剂及仪器设备 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-29页 |
| 2．1 模板的制备 | 第27页 |
| 2．2 引物设计与合成 | 第27页 |
| 2．3 PCR反应及PCR产物的回收 | 第27-28页 |
| 2．4 扩增产物的克隆 | 第28页 |
| 2．5 pT-VP4Ⅱ重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| 2．6 线性化pBI121载体的制备 | 第28-29页 |
| 2．7 线性化载体与VP4基因片段的连接 | 第29页 |
| 2．8 pBI-VP4重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| 2．9 pBI-VP4重组质粒转化农杆菌感受态 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 3．1 pT-VP4Ⅰ PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| 3．2 重组质粒pT-VP4Ⅱ鉴定结果 | 第30页 |
| 3．3 重组质粒pBI-VP4鉴定结果 | 第30-31页 |
| 3．4 pBI-VP4／EHA105菌落PCR鉴定结果 | 第31-32页 |
| 实验三 VP4、VP7在烟草中的表达及转基因烟草的检测 | 第32-39页 |
| 1 实验材料 | 第32页 |
| 1．1 植物材料 | 第32页 |
| 1．2 主要试剂 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-36页 |
| 2．1 烟草再生体系的建立及抗生素敏感性试验 | 第32页 |
| 2．2 pBI-VP4／EHA105、pB-VP7／EHA105转化烟草(农杆菌介导法) | 第32-33页 |
| 2．3 转基因烟草的分子检测 | 第33-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3．1 烟草转化、筛选、移栽结果 | 第36-37页 |
| 3．2 转基因烟草PCR检测结果 | 第37页 |
| 3．3 转基因烟草Southern-blot检测结果 | 第37-38页 |
| 3．4 转基因烟草Western-blot检测结果 | 第38-39页 |
| 第三章 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 附录 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 个人简历 | 第54-55页 |
| 导师评语 | 第55页 |
