| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-36页 |
| 引言 | 第7页 |
| ·体细胞克隆技术综述 | 第7-14页 |
| ·基因组DNA甲基化 | 第8-9页 |
| ·X染色体失活 | 第9-10页 |
| ·端粒和端粒酶 | 第10页 |
| ·印记基因的表达 | 第10-11页 |
| ·发育相关基因 | 第11-14页 |
| ·肺发育的分子生物学 | 第14-24页 |
| ·哺乳动物胎肺的发育 | 第14页 |
| ·胎肺发育的影响因素 | 第14-15页 |
| ·肺发育的相关生长因子 | 第15-24页 |
| ·组蛋白乙酰化研究 | 第24-31页 |
| ·组蛋白概述 | 第25页 |
| ·组蛋白乙酰转移酶和脱乙酰转移酶 | 第25-26页 |
| ·组蛋白乙酰化的作用 | 第26-31页 |
| ·本实验所涉及的相关技术 | 第31-36页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第31-35页 |
| ·组蛋白乙酰化的研究方案 | 第35-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-59页 |
| ·实验材料 | 第36-45页 |
| ·菌株及质粒 | 第36页 |
| ·实验用酶 | 第36页 |
| ·药品和试剂 | 第36页 |
| ·培养基的配制 | 第36页 |
| ·试剂的配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·引物的设计和合成 | 第38-41页 |
| ·克隆牛样品情况 | 第41-45页 |
| ·实验方法 | 第45-59页 |
| ·利用TRIZOL试剂盒提取总RNA一步法 | 第45页 |
| ·总RNA的纯化(除去RNA中DNA) | 第45-46页 |
| ·反转录 | 第46页 |
| ·反转录产物cDNA PCR | 第46-47页 |
| ·外源片段的胶回收方法(Q-BioGene，Bio101 System) | 第47-48页 |
| ·外源片段的过柱直接回收方法(Daopu柱离心式PCR产物回收试剂盒) | 第48页 |
| ·pMD-T18载体的连接反应(Takara) | 第48页 |
| ·感受态细胞的制备、效价的测定及质粒DNA的转化 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的快速鉴定Cracking法 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第50-51页 |
| ·哺乳动物组织DNA的提取 | 第51页 |
| ·DNA测序反应程序 | 第51-52页 |
| ·乙酰化组蛋白H4免疫沉淀反应(Acetyl-Hi stone H4 CHIP Assay Kit) | 第52-55页 |
| ·牛体细胞克隆技术简介 | 第55-56页 |
| 整个试验的总体试验设计如下: | 第55-56页 |
| ·组织切片的制作 | 第56页 |
| ·定量PCR分析 | 第56-59页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第59-90页 |
| ·克隆牛肺脏组织的解剖学研究 | 第59-60页 |
| ·牛相关生长因子基因的克隆与测序分析 | 第60-64页 |
| ·新基因的PCR产物琼脂糖胶电泳检测 | 第61页 |
| ·PCR产物测序结果分析 | 第61-64页 |
| ·样品组蛋白乙酰化水平分析 | 第64-77页 |
| ·超声波打断DNA条件确定 | 第64-65页 |
| ·样品乙酰化组蛋白免疫沉淀反应(ChIP)结果 | 第65-66页 |
| ·样品组蛋白乙酰化水平的定量PCR研究 | 第66-77页 |
| ·样品mRNA表达的定量分析 | 第77-83页 |
| ·样品总RNA的提取、纯化及mRNA反转录结果分析 | 第77-78页 |
| ·mRNA表达水平的定量PCR研究 | 第78-83页 |
| ·小结 | 第83页 |
| ·基因不同区域的组蛋白乙酰化水平研究 | 第83-89页 |
| ·IGF1基因不同区域的组蛋白乙酰化水平研究 | 第83-86页 |
| ·GH基因不同区域的组蛋白乙酰化水平研究 | 第86-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 个人简历 | 第97页 |
