| 提要 | 第1-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-28页 |
| ·青霉素酰化酶概述 | 第9-10页 |
| ·青霉素酰化酶的表达、纯化 | 第10-18页 |
| ·青霉素酰化酶的表达、纯化 | 第10-12页 |
| ·固定化金属螯合层析 | 第12-18页 |
| ·β－内酰胺类抗生素的酶促合成 | 第18-27页 |
| ·青霉素酰化酶在工业上的应用 | 第19-20页 |
| ·青霉素酰化酶的合成/水解(S/H) | 第20-27页 |
| ·限制扩散 | 第27页 |
| ·研究青霉素酰化酶 S/H意义 | 第27-28页 |
| 第二章 重组青霉素酰化酶的克隆、表达及快速纯化 | 第28-46页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·材料和方法 | 第29-30页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| ·质粒与菌种 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·酶和试剂 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·质粒DNA的小量快速抽提 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第31-32页 |
| ·PCR反应的体系和条件 | 第32-33页 |
| ·PCR产物和DNA片段的回收 | 第33页 |
| ·大肠杆菌JM109(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第33页 |
| ·发酵、表达方法 | 第33-34页 |
| ·纯化 | 第34页 |
| ·金属螯和层析填料 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第34-36页 |
| ·Bradford 法 | 第36-37页 |
| ·青霉素G酰化酶的酶活测定方法 | 第37页 |
| ·实验内容和结果 | 第37-41页 |
| ·基因扩增、表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·细胞培养发酵条件 | 第40-41页 |
| ·重组青霉素酰化酶的表达 | 第41-42页 |
| ·不同的IPTG浓度对表达水平的影响 | 第41页 |
| ·温度对表达蛋白可溶性的影响 | 第41-42页 |
| ·酶的分离纯化和SDS-PAGE | 第42页 |
| ·Co2＋-IDA亲和载体纯化效率 | 第42-43页 |
| ·青霉素酰化酶的纯化结果 | 第43-44页 |
| ·测定纯化后PGA的酶活 | 第44页 |
| ·蛋白含量测定 | 第44页 |
| ·纯化数据 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 青霉素G酰化酶S/H测定体系的建立 | 第46-60页 |
| ·引言 | 第46-48页 |
| ·材料和方法 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·流动相的配制 | 第48-49页 |
| ·D -苯甘酰氨、7－ADCA、苯甘氨酸、头孢立新进样溶液的配制 | 第49页 |
| ·反应体系组成 | 第49页 |
| ·反应条件 | 第49页 |
| ·高效液相色谱仪使用流程 | 第49-50页 |
| ·建立反应体系中四种物质的分离条件 | 第50-51页 |
| ·反应体系的建立 | 第51-55页 |
| ·结果 | 第55-59页 |
| ·HPLC分离流动相条件 | 第55页 |
| ·流动相梯度和对应反应体系中四种物质的分离图谱 | 第55-56页 |
| ·D-苯甘酰胺、7－ADCA、苯甘氨酸、头孢立新 的K值 | 第56-57页 |
| ·十种青霉素酰化酶的S/H | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第66-67页 |
| 致 谢 | 第67-68页 |
| 中文摘要 | 第68-71页 |
| Abstract | 第71-73页 |
