| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 一、前言 | 第9-17页 |
| 1.1 精子的发生 | 第9页 |
| 1.2 MAPK信号通路在动物繁殖中的作用 | 第9-10页 |
| 1.3 miRNAs的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.3.1 miRNAs的发现和研究方法 | 第11-12页 |
| 1.3.2 miRNAs的合成及作用机制 | 第12-13页 |
| 1.3.3 miRNA与哺乳动物生殖 | 第13-15页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第15-17页 |
| 二、12 个MicroRNAs在香猪睾丸组织中的发育性变化 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-23页 |
| 2.1.1 实验样本 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要的试剂盒 | 第18页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第20-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 香猪睾丸12个microRNA的选择及其生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2 香猪睾丸组织学结构变化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 香猪睾丸中12个microRNA及其靶基因表达规律 | 第25-33页 |
| 2.2.3.1 猪睾丸组织总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.3.2 RNA浓度和纯度的检测 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 cDNA合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3.4 PCR扩增 | 第27-33页 |
| 三、结果 | 第33-77页 |
| 3.1 香猪睾丸12个microRNA的选择及其生物信息学分析 | 第33-53页 |
| 3.1.1 12 个miRNA的选择 | 第33页 |
| 3.1.2 12 个miRNA靶基因预测 | 第33-47页 |
| 3.1.3 miRNA靶基因GO功能分析 | 第47页 |
| 3.1.4 miRNA靶基因KEGG信号通路分析 | 第47-51页 |
| 3.1.5 靶基因与miRNA的靶向关系 | 第51-53页 |
| 3.2 香猪睾丸组织学结构变化 | 第53-56页 |
| 3.3 香猪睾丸中12个miRNA及其靶基因的表达规律 | 第56-77页 |
| 3.3.1 RNA提取结果 | 第56页 |
| 3.3.2 PCR扩增和克隆测序 | 第56-57页 |
| 3.3.3 标准曲线的制作 | 第57-63页 |
| 3.3.4 12 个miRNA表达量的检测 | 第63-71页 |
| 3.3.5 靶基因表达量的检测 | 第71-74页 |
| 3.3.6 miRNA与靶基因的相关性 | 第74-77页 |
| 四、讨论 | 第77-85页 |
| 4.1 香猪睾丸组织的形态学分析 | 第77页 |
| 4.2 靶基因富集分析 | 第77页 |
| 4.3 12 个miRNA表达分析 | 第77-81页 |
| 4.3.1 miR-449b-5p表达分析 | 第78页 |
| 4.3.2 miR2223p表达分析 | 第78-79页 |
| 4.3.3 let-7f-5p表达分析 | 第79页 |
| 4.3.4 miR1403p表达分析 | 第79页 |
| 4.3.5 miR163p表达分析 | 第79-80页 |
| 4.3.6 miR-181b-5p表达分析 | 第80页 |
| 4.3.7 miR-29c-3p表达分析 | 第80页 |
| 4.3.8 miR13p表达分析 | 第80页 |
| 4.3.9 miR4245p表达分析 | 第80-81页 |
| 4.3.10 miR-23a-3p表达分析 | 第81页 |
| 4.3.11 miR1855p表达分析 | 第81页 |
| 4.4 靶基因表达分析 | 第81-84页 |
| 4.4.1 FGFR1/2 基因 | 第82页 |
| 4.4.2 GRB2基因 | 第82页 |
| 4.4.3 Raf-1 基因 | 第82-83页 |
| 4.4.4 MAP2K1（MEK1）基因 | 第83页 |
| 4.4.5 MAPK1（ERK1）基因 | 第83页 |
| 4.4.6 c-fos基因 | 第83-84页 |
| 4.5 相关性分析 | 第84-85页 |
| 五、总结 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 附录一 | 第91-92页 |
| 图版一 | 第92-97页 |
