| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 前言 | 第7-10页 |
| 第一部分 Ad-KGF 的构建与鉴定 | 第10-24页 |
| 1 材料及方法 | 第10-18页 |
| ·材料 | 第10页 |
| ·主要仪器设备 | 第10页 |
| ·试剂 | 第10页 |
| ·细胞和载体质粒 | 第10页 |
| ·方法 | 第10-18页 |
| ·携带 KGF 基因的重组穿梭质粒的构建(pShuttle- KGF)及鉴定 | 第10-13页 |
| ·目的基因的获得 | 第10-11页 |
| ·穿梭质粒的处理 | 第11-12页 |
| ·连接 | 第12页 |
| ·鉴定 | 第12-13页 |
| ·携带 KGF 基因的重组腺病毒载体的构建(pAdxsi-KGF)及鉴定 | 第13-14页 |
| ·pAdxsi 载体的处理 | 第13-14页 |
| ·穿梭质粒的处理 | 第14页 |
| ·连接 | 第14页 |
| ·鉴定 | 第14页 |
| ·重组腺病毒的生产、纯化及滴度检测 | 第14-16页 |
| ·腺病毒载体质粒的线性化 | 第14-15页 |
| ·转染 HEK293 细胞 | 第15页 |
| ·收毒 | 第15页 |
| ·扩增 | 第15页 |
| ·病毒的滴度测定 | 第15-16页 |
| ·Ad-KGF 对 A549 细胞转染效率的测定 | 第16页 |
| ·ELISA 方法检测 KGF 蛋白的表达 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR 法检测 KGF 基因的表达 | 第17-18页 |
| ·统计学处理 | 第18页 |
| 2 结果 | 第18-21页 |
| ·重组穿梭质粒 pShuttle-KGF 的构建及鉴定 | 第18-19页 |
| ·重组腺病毒质粒 pAdxsi-KGF 的构建及鉴定 | 第19页 |
| ·Ad-KGF 的制备 | 第19-20页 |
| ·Ad-KGF 对 A549 细胞转染效率的测定 | 第20页 |
| ·ELISA 方法检测 KGF 蛋白的表达 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR 法检测 KGF 基因的表达 | 第21页 |
| 3 讨论 | 第21-24页 |
| 第二部分 Ad-KGF 对低氧条件下 A549 细胞氧化应激损伤的防治作用 | 第24-35页 |
| 1 材料及方法 | 第24-29页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·细胞和载体 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·相关试剂的配置 | 第24-25页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·样品的收集 | 第25页 |
| ·ELISA 法检测细胞培养上清中 ROS 浓度 | 第25-26页 |
| ·比色法检测细胞培养上清中 NOS 活力 | 第26-27页 |
| ·比色法检测细胞培养上清中 LDH 的含量 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR 法检测凋亡基因 p53、Bax 表达 | 第28-29页 |
| ·统计学处理 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-33页 |
| ·细胞培养上清中 ROS 浓度 | 第29-30页 |
| ·细胞培养上清中 NOS 活力 | 第30-31页 |
| ·细胞培养上清中 LDH 含量 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR 方法检测凋亡基因 p53、Bax 的表达 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三部分 全文结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 英文缩略词表 | 第41-43页 |
