| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 相关研究进展和立题意义 | 第14-36页 |
| 1 RNA干扰与抗病毒基因工程及作物遗传改良 | 第14-19页 |
| ·RNA干扰机制及研究进展 | 第14-15页 |
| ·RNA干扰技术及其特点 | 第15-16页 |
| ·RNAi在作物遗传改良上的应用 | 第16-17页 |
| ·RNA干扰在植物抗病毒基因工程中的应用 | 第17-18页 |
| ·RNA干扰技术的相关问题与展望 | 第18-19页 |
| 2 核酶与抗病毒基因工程 | 第19-22页 |
| ·锤头形核酶的结构特点 | 第19-20页 |
| ·人工合成核酶的设计原则 | 第20页 |
| ·锤头型核酶催化机制 | 第20-21页 |
| ·核酶的应用展望 | 第21-22页 |
| 3 标记基因和无标记转基因研究进展 | 第22-25页 |
| ·标记基因在转化系统中的应用 | 第22-23页 |
| ·标记基因带来的问题 | 第23页 |
| ·无抗性标记基因转化系统 | 第23-25页 |
| 4 马铃薯卷叶病毒、纺锤块茎类病毒及其抗病毒基因工程 | 第25-33页 |
| ·我国马铃薯生产现状及其病毒性病害 | 第25-26页 |
| ·马铃薯卷叶病毒 | 第26-27页 |
| ·马铃薯纺锤块茎类病毒 | 第27-28页 |
| ·马铃薯抗病毒研究进展 | 第28-29页 |
| ·抗PLRV基因工程 | 第29-32页 |
| ·抗PSTVd基因工程 | 第32-33页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第33-36页 |
| 第二章 PLRV IS的克隆与抗PSTVd核酶基因合成 | 第36-54页 |
| 1 实验材料 | 第36-38页 |
| ·质粒载体、宿主菌和植物材料 | 第36页 |
| ·生化试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·PCR及测序引物 | 第36-37页 |
| ·常用培养基和溶液 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-44页 |
| ·PLRV IS基因克隆 | 第38-43页 |
| ·特异切割PSTVd RNA的二价核酶的合成 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-51页 |
| ·PLRV IS基因的克隆 | 第45-49页 |
| ·核酶的合成 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·改进法提取马铃薯植物总RNA | 第51-52页 |
| ·PLRV IS的克隆和序列分析 | 第52页 |
| ·核酶的合成 | 第52-54页 |
| 第三章 无标记PLRV IS反向重复序列与切割PSTVd核酶双价表达载体p3301-DR-ISir的构建和鉴定 | 第54-64页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| ·质粒载体、宿主菌和植物材料 | 第54页 |
| ·生化试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·PCR检测引物 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-58页 |
| ·质粒的酶切与连接 | 第54-55页 |
| ·表达载体p3301-DR-Isir的构建策略与构建方法 | 第55-58页 |
| ·表达载体p3301-DR-Isir的鉴定 | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-63页 |
| ·特异切割PSTVd核酶中问载体pSKN-DR的构建与鉴定 | 第58-59页 |
| ·特异切割PSTVd核酶中间载体pSKN-35S-DR的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·特异切割PSTVd核酶表达载体p3301-DR的构建与鉴定 | 第60页 |
| ·PLRV IS中间载体pKAN-IS的构建和鉴定 | 第60-61页 |
| ·PLRV IS反向重复序列与切割PSTVd核酶双价表达载体p3301-DR-Isir的构建与鉴定 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 农杆菌介导转化马铃薯初探 | 第64-76页 |
| 1 实验材料 | 第64-67页 |
| ·质粒载体、宿主菌和植物材料 | 第64页 |
| ·生化试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器设备和器械的洗涤和消毒 | 第64页 |
| ·PCR引物 | 第64-65页 |
| ·常用培养基和溶液 | 第65-67页 |
| 2 实验方法 | 第67-69页 |
| ·植物表达载体p3301-DR-ISir向农杆菌感受态细胞的转化 | 第67页 |
| ·农杆菌介导马铃薯转化 | 第67-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-73页 |
| ·植物表达载体p3301-DR-ISir向农杆菌感受态细胞的转化 | 第69-70页 |
| ·马铃薯最佳转化条件的初步探索 | 第70-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| ·影响马铃薯转化率的因素 | 第73-74页 |
| ·无标记转基因应用前景 | 第74-75页 |
| 5 进一步研究计划 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 缩略词 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读硕士研究生期间发表的论文 | 第87页 |
| 个人简况 | 第87-88页 |
