| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| ·马流感病原学概况 | 第13-17页 |
| ·马流感病毒的形态结构 | 第13-14页 |
| ·马流感病毒的基因组结构及其产物功能 | 第14-15页 |
| ·理化特性 | 第15页 |
| ·培养特性 | 第15页 |
| ·病毒的复制 | 第15-16页 |
| ·EIV 的变异 | 第16-17页 |
| ·马流感诊断方法研究进展与应用概况 | 第17-20页 |
| ·病原学诊断方法 | 第17-19页 |
| ·血清学诊断技术 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 马流感病毒HA 基因的克隆与序列分析 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌种、鸡血与鸡胚 | 第22页 |
| ·质粒载体与工具酶 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·其它主要化学试剂 | 第22页 |
| ·常用溶液及培养基 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·病毒的分离 | 第23页 |
| ·引物的设计及合成 | 第23-24页 |
| ·病毒总RNA 的提取 | 第24页 |
| ·cDNA 的合成 | 第24页 |
| ·PCR 扩增HA 片段 | 第24页 |
| ·PCR 产物的回收和纯化 | 第24页 |
| ·目的DNA 片段连接T 载体 | 第24-25页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第25页 |
| ·阳性重组质粒的筛选及鉴定 | 第25-26页 |
| ·目的基因片段核苷酸序列的测定与序列分析 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·EIV 的分离及电镜观察 | 第26-27页 |
| ·EIV 的亚型鉴定及命名 | 第27页 |
| ·EIV 的HA 基因RT-PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·HA 基因的克隆及鉴定 | 第28页 |
| ·HA 基因的序列测定 | 第28页 |
| ·HA 基因的同源性分析 | 第28页 |
| ·HA 基因的遗传进化树分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 马流感病毒双重RT-PCR 检测方法的建立 | 第31-37页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·病毒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第32页 |
| ·病毒RNA 反转录合成cDNA | 第32页 |
| ·EIV 通用型特异性RT-PCR 扩增 | 第32页 |
| ·H3N8 亚型EIV 特异性RT-PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·双重RT-PCR 反应条件优化 | 第33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·敏感性试验 | 第33页 |
| ·双重RT-PCR 检测方法的初步应用 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-36页 |
| ·EIV 通用型特异性目的片段扩增结果 | 第33-34页 |
| ·H3N8 亚型EIV 特异性片段扩增结果 | 第34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·双重RT-PCR 反应条件优化 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 特异性 | 第35页 |
| ·RT-PCR 敏感性 | 第35页 |
| ·样品检测 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 H3N8 亚型马流感病毒荧光定量PCR 检测方法的建立 | 第37-49页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·病毒与菌株 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·引物及探针的设计与合成 | 第37页 |
| ·EIV 基因组RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·反转录合成cDNA | 第38页 |
| ·标准质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·荧光定量PCR 方法的建立 | 第40-42页 |
| ·荧光定量PCR 方法的评价 | 第42页 |
| ·临床样品检测 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-47页 |
| ·常规PCR 扩增HA-standard 基因片段电泳结果 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·标准质粒浓度的计算 | 第44页 |
| ·荧光定量PCR 反应条件的优化 | 第44页 |
| ·荧光定量PCR 标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR 的特异性 | 第45页 |
| ·荧光定量PCR 的重复性 | 第45-46页 |
| ·荧光定量PCR 的敏感性 | 第46页 |
| ·临床样品检测结果 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
