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磷酸-1-鞘氨醇在植物抗病反应中的作用及水稻和拟南芥BIK1在逆境反应中的功能分析

致谢第1-12页
摘要第12-14页
Abstract第14-16页
第一章 文献综述和研究背景第16-25页
   ·植物的免疫抗病反应第16-19页
     ·植物先天免疫性(innate immunity)第16-19页
     ·植物的诱导免疫性(inducible immunity)第19页
   ·植物抗病信号传导途径第19-23页
     ·SA信号途径第19-22页
     ·JA/ET信号途径第22-23页
   ·本研究的目的意义和主要研究内容第23-25页
第二章 水稻鞘氨醇-1-磷酸代谢基因OsSPK1和OsSPL1的功能分析第25-65页
 摘要第25-26页
   ·前言第26-28页
   ·材料与方法第28-37页
     ·供试稻瘟菌菌株与接种第28-29页
     ·水稻幼苗培育与处理第29页
     ·OsSPK1和OsSPL1 cDNA的克隆第29-30页
     ·DNA的序列测定和分析第30页
     ·总RNA提取第30页
     ·RT-PCR分析第30-31页
     ·植物转化双元表达载体pCHF3-OsSPK1和pCHF3-OsSPL1的构建第31-32页
     ·转OsSPK1和OsSPL1基因烟草植株的获得第32-33页
     ·烟草基因组DNA提取第33页
     ·转基因烟草的分子鉴定第33页
     ·转基因烟草植株中OsSPK1和OsSPL1基因和PR基因的表达分析第33-34页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株抗病性测定第34-35页
       ·烟草花叶病毒的接种处理第34-35页
       ·烟草野火病菌接种处理第35页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草种子对ABA的反应第35页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株叶片抗盐性生物测定第35页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株抗氧化胁迫测定第35-36页
     ·叶绿素含量的测定第36页
     ·Fumonisin B1引起过敏性反应分析第36-37页
     ·1-磷酸鞘氨醇的测定第37页
   ·结果与分析第37-63页
     ·水稻OsSPK1和OsSPL1基因克隆及蛋白特征分析第37-38页
     ·OsSPK1、OsSPK2和OsSPL1在水稻抗病反应中的差异表达第38-43页
     ·植物转化双元表达载体pCHF3-OsSPK1和pCHF3-OsSPL1的构建第43页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株的获得第43-48页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株的分子鉴定第48页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草株系的抗病性表型第48-50页
       ·烟草花叶病毒病抗性表型第48-50页
       ·烟草野火病抗性表型第50页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株中PR基因表达的变化第50页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株的ABA敏感性第50-54页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株的抗盐性表型第54页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株的抗氧化胁迫表型第54-57页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株的HR反应第57页
     ·OsSPK1和OsSPL1转基因烟草植株中S1P的含量第57-63页
   ·讨论第63-65页
第三章 AtBIK1参与拟南芥磷营养的调控第65-96页
   ·前言第66-68页
   ·材料和方法第68-74页
     ·供试材料和生长条件第68-69页
     ·植物总RNA的提取第69页
     ·AtBlK1基因Promoter::GUS载体的构建第69-70页
     ·GUS染色第70页
     ·主根、侧根和根毛数的测定第70页
     ·花青素含量的测定第70页
     ·植株总磷含量测定第70-71页
     ·酸性磷酸酶的测定和染色第71页
     ·H2O2和超氧阴离子的测定第71页
     ·Botrytis cinerea接种第71-72页
       ·叶绿素含量的测定第72页
       ·腐败植株数测定第72页
       ·真菌生长量测定第72页
     ·Altenaria brassicicola接种处理第72页
     ·RT-PCR分析第72-73页
     ·Q-PCR第73-74页
   ·结果与分析第74-91页
     ·AtBlK1在各组织中的表达情况第74-75页
     ·根系统结构的改变第75页
     ·bik1植株中花青素含量增加第75-81页
     ·AtBIK1功能丧失影响植株总磷的积累第81页
     ·AtBIK1的功能丧失降低酸性磷酸酶活性第81页
     ·bik1突变体植株中磷饥饿应答基因诱导基因表达下降第81页
     ·bik1突变体植株中活性氧产生下降第81页
     ·在缺磷条件下bik1突变体进一步增加Botrytis cinerea的感病性第81-86页
     ·在缺磷条件下bik1突变体对Altenaria brassicicola的抗性表型第86页
     ·PR基因表达的变化第86-91页
     ·bik1突变体中miR399及其靶标基因表达变化第91页
   ·讨论:第91-96页
第四章 水稻OsBIK1的克隆鉴定与功能分析第96-120页
 摘要第96-97页
   ·前言第97页
   ·材料和方法第97-102页
     ·供试水稻、病菌菌株、诱导处理及病菌接种第97页
     ·水稻OsBIK1基因cDNA序列的克隆第97页
     ·DNA的序列测定和分析第97-98页
     ·水稻总RNA的提取第98页
     ·OsBIK1在水稻抗病反应中差异表达的RT-PCR分析第98页
     ·水稻OsBIK1基因植物转化双元表达载体的构建第98页
     ·OsBIK1转基因拟南芥植株的抗性第98页
     ·OsBIK1转基因水稻植株的获得第98-100页
       ·植物材料、菌种和载体第98-99页
       ·水稻的农杆菌转化和抗性植株的获得第99-100页
     ·水稻基因组的提取和OsBIK1转基因水稻植株的分子鉴定第100页
     ·OsBIK1转基因水稻的生长状况第100-101页
     ·OsBIK1转基因水稻稻瘟病抗性测定第101页
     ·OsBIK1转基因水稻种子对ABA的反应第101页
     ·OsBIK1转基因水稻植株抗盐性生物测定第101页
     ·OsBIK1转基因水稻植株抗干旱测定第101-102页
     ·OsBIK1转基因水稻种子抗冻害测定第102页
     ·Q-PCR第102页
   ·结果和分析第102-118页
     ·OsBIK1基因全长cDNA序列的克隆及序列分析第102页
     ·OsBIK1蛋白的结构与系统进化树分析第102页
     ·OsBIK1基因在水稻抗病反应中的差异表达第102-105页
     ·植物转化双元表达载体pCAMBIA 99-1-OsBIK1的构建第105页
     ·OsBIK1能互补拟南芥bik1的功能第105页
     ·OsBIK1转基因水稻植株的获得第105-109页
     ·OsBIK1转基因水稻植株的分子鉴定第109页
     ·OsBIK1转基因水稻植株的生长状况第109页
     ·OsBIK1转基因水稻植株提高稻瘟菌抗性第109页
     ·OsBIK1转基因水稻植株对ABA敏感性不变第109-113页
     ·OsBIK1转基因水稻植株提高冻害抗性第113页
     ·OsBIK1转基因水稻植株提高抗盐性第113页
     ·OsBIK1转基因水稻植株提高对干旱胁迫的抗性第113页
     ·逆境胁迫下OsBIK1基因表达的变化第113-118页
   ·讨论第118-120页
第五章 全文小结和今后的研究第120-122页
参考文献第122-130页

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