| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 一 文献综述 | 第10-26页 |
| 1 石杉碱甲的发现及临床应用 | 第10页 |
| 2 石杉碱甲工业生产的现状 | 第10-12页 |
| ·直接从千层塔中提取 | 第10-11页 |
| ·石杉碱甲(HUP A)的全合成及基于HUP A的结构改造研究 | 第11-12页 |
| 3 产石杉碱甲的内生真菌的发现及其意义 | 第12-14页 |
| ·内生真菌研究的应用 | 第12-13页 |
| ·产石杉碱甲的内生真菌的发现 | 第13-14页 |
| ·产石杉碱甲的内生真菌研究的意义 | 第14页 |
| 4 真菌发酵产石杉碱甲的优势 | 第14-15页 |
| 5 真菌发酵动力学的研究 | 第15-16页 |
| 6 物理、化学方法诱变真菌的研究 | 第16-20页 |
| ·物理诱变原理 | 第16-18页 |
| ·化学诱变原理 | 第18-20页 |
| 7 真菌基因组DNA提取的研究现状 | 第20页 |
| 8 DNA分子标记技术 | 第20-25页 |
| ·DNA分子标记的概念 | 第20-21页 |
| ·DNA分子标记的分类 | 第21-25页 |
| 9 本课题研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 二 材料和方法 | 第26-34页 |
| 1 实验材料 | 第26页 |
| 2 仪器和试剂 | 第26-27页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26-27页 |
| 3 研究方法 | 第27-34页 |
| ·千层塔产石杉碱甲内生真菌的分离与鉴定 | 第27-29页 |
| ·内生真菌的分离与纯化 | 第27页 |
| ·菌株的鉴定 | 第27-28页 |
| ·菌株的形态学鉴定 | 第27页 |
| ·菌株的分子鉴定 | 第27-28页 |
| ·产石杉碱甲菌株的筛选 | 第28-29页 |
| ·石杉碱甲的提取 | 第28页 |
| ·石杉碱甲含量的测定 | 第28-29页 |
| ·物理与化学诱变筛选产石杉碱甲高产菌株 | 第29-30页 |
| ·物理方法诱变内生真菌 | 第29-30页 |
| ·化学方法诱变内生真菌 | 第30页 |
| ·突变菌株的筛选 | 第30页 |
| ·内生真菌SHB产石杉碱甲发酵条件的研究 | 第30-31页 |
| ·种子培养 | 第31页 |
| ·发酵条件选择 | 第31页 |
| ·RAPD分子检测 | 第31-34页 |
| ·真菌基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·DNA的纯度及浓度测定 | 第31-32页 |
| ·RAPD-PCR反应体系的构建 | 第32-33页 |
| ·PCR反应产物检测 | 第33页 |
| ·RAPD分析 | 第33-34页 |
| 三 结果与分析 | 第34-50页 |
| 1 千层塔内生真菌的分离与鉴定 | 第34-36页 |
| ·千层塔内生真菌的形态特征 | 第34-35页 |
| ·内生真菌rDNA ITS序列分析 | 第35-36页 |
| 2 产石杉碱甲内生真菌的筛选 | 第36页 |
| 3 物理与化学诱变筛选产石杉碱甲高产菌株 | 第36-39页 |
| ·微波诱变内生真菌的致死率及突变株的检测 | 第36-37页 |
| ·紫外线辐射诱变内生真菌的致死率及突变株的检测 | 第37-38页 |
| ·Co~(60)射线辐射诱变内生真菌的致死率及突变株的检测 | 第38页 |
| ·亚硝酸(HNO_2)诱变内生真菌的致死率及突变株的检测 | 第38-39页 |
| ·硫酸二乙酯(DES)诱变内生真菌的致死率及突变株的检测 | 第39页 |
| 4 发酵条件对千层塔内生真菌石杉碱甲的影响 | 第39-45页 |
| ·温度对内生真菌产石杉碱甲的影响 | 第39-40页 |
| ·PH对内生真菌产石杉碱甲影响 | 第40-41页 |
| ·接种量对内生真菌产石杉碱甲的影响 | 第41页 |
| ·种龄对内生真菌产石杉碱甲的影响 | 第41-42页 |
| ·转速对内生真菌产石杉碱甲的影响 | 第42-43页 |
| ·发酵时间对内生真产石杉碱甲的影响 | 第43页 |
| ·正交试验优化千层塔内生真菌SHB发酵条件 | 第43-45页 |
| 5 菌株RAPD分子检测 | 第45-50页 |
| ·真菌基因组DNA的提取 | 第45-48页 |
| ·紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度 | 第45-46页 |
| ·DNA的电泳检测 | 第46-47页 |
| ·五种方法提取的DNA的PCR扩增效果 | 第47-48页 |
| ·RAPD-PCR最佳反应体系的建立 | 第48页 |
| ·RAPD随机引物的筛选 | 第48-49页 |
| ·RAPD标记的分析 | 第49-50页 |
| 四 分析与讨论 | 第50-53页 |
| 1 千层塔产石杉碱甲内生真菌的分离鉴定 | 第50-51页 |
| 2 物理与化学诱变 | 第51页 |
| 3 内生真菌SHB发酵 | 第51-52页 |
| 4 RAPD分子标记分析 | 第52-53页 |
| 五 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录一 主要试剂配制 | 第62-65页 |
| 附录二 缩略语表 | 第65-66页 |
| 附录三 内生真菌ⅠITS序列 | 第66-67页 |
| 附录四 内生真菌ⅡITS序列 | 第67-68页 |
| 附录五 内生真菌ⅢITS序列 | 第68-70页 |
| 附录六 内生真菌ⅣITS序列 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
