| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 1 内皮细胞的活化促进了血管性疾病的病理过程 | 第10-11页 |
| ·内皮细胞的活化导致了血管的炎症 | 第10页 |
| ·内皮细胞的活化促进了血管性疾病的病理过程 | 第10-11页 |
| 2 NFAT参与内皮细胞炎症 | 第11-14页 |
| ·NFAT家族成员及结构域的功能 | 第11页 |
| ·促炎因子诱导NFAT的入核和激活 | 第11-12页 |
| ·NFAT促进下游炎症基因的表达 | 第12-14页 |
| ·NFAT的激活剂和抑制剂进一步证明其促炎的作用 | 第14页 |
| 3 SIRT1的功能提示它可能具有抗炎作用 | 第14-16页 |
| ·Ⅲ类HDAC SIRT1调节多种靶蛋白发挥功能 | 第14-16页 |
| ·SIRT1抑制NF κ B及AP-1的转录活性及下游炎症分子的表达 | 第16页 |
| ·SIRT1的激活剂resveratrol抑制NF κ B的转录活性以及下游炎症分子的表达 | 第16页 |
| 4 SIRT1抑制NFAT的转录活性以及下游炎症基因表达是本研究的重点 | 第16-17页 |
| 实验材料 | 第17-19页 |
| 1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2 限制性内切酶和其他修饰酶 | 第17页 |
| 3 细胞系 | 第17页 |
| 4 其它主要试剂和材料 | 第17-18页 |
| 5 实验用抗体 | 第18页 |
| 6 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 实验方法 | 第19-34页 |
| 1 基本技术路线 | 第19页 |
| 2 细菌操作与质粒的转化 | 第19-21页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5-α制备 | 第19-20页 |
| ·质粒的转化和扩增 | 第20页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第20-21页 |
| 3 克隆构建 | 第21-22页 |
| ·NFATc3表达质粒构建 | 第21页 |
| ·NFATc3片段缺失突变质粒构建 | 第21-22页 |
| 4 细胞培养 | 第22-23页 |
| ·细胞的生长条件 | 第22页 |
| ·细胞的传代 | 第22页 |
| ·细胞的复苏及冻存 | 第22-23页 |
| 5. 双荧光素酶报告系统测定启动子活性 | 第23页 |
| 6 Realtime-PCR | 第23-25页 |
| ·RNA提取 | 第23-24页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR) | 第24页 |
| ·Realtime-PCR | 第24-25页 |
| 7 Western Blotting | 第25-28页 |
| ·细胞及组织总蛋白提取 | 第25页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第25-26页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第26-27页 |
| ·抗原抗体反应 | 第27页 |
| ·辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白(ECL反应) | 第27页 |
| ·溶液配制 | 第27-28页 |
| 8 蛋白质免疫共沉淀 | 第28-29页 |
| ·细胞裂解 | 第28页 |
| ·免疫共沉淀 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE | 第29页 |
| ·溶液配制 | 第29页 |
| 9 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离培养 | 第29-30页 |
| ·试剂与器材 | 第29页 |
| ·标本的收集 | 第29页 |
| ·脐带内皮细胞分离 | 第29-30页 |
| ·内皮细胞的传代培养 | 第30页 |
| ·血管内皮细胞的鉴定 | 第30页 |
| 10 腺病毒的构建,包装及内皮细胞腺病毒感染 | 第30-32页 |
| ·腺病毒构建 | 第30-31页 |
| ·腺病毒包装 | 第31-32页 |
| ·腺病毒感染内皮细胞 | 第32页 |
| 11. 免疫荧光 | 第32-34页 |
| 实验结果 | 第34-58页 |
| 1. PMA/Io诱导内皮细胞炎症基因的表达 | 第34-35页 |
| 2. NFATc3介导了PMA/Io诱导的内皮细胞的炎症基因的表达 | 第35-38页 |
| 3. SIRT1抑制NFATc3依赖的内皮细胞炎症分子的表达 | 第38-48页 |
| 4. SIRT1不影响NFATc3的表达 | 第48-49页 |
| 5. SIRT1抑制NFATc3的转录活性 | 第49-52页 |
| 6. SIRT1不影响NFATc3募集AP-1的能力 | 第52-53页 |
| 7. SIRT1与NFATc3相互作用 | 第53-54页 |
| 8. SIRT1去乙酰化NFATc3 | 第54-56页 |
| 9. PMA/Io诱导内皮细胞SIRT1表达上调 | 第56-58页 |
| 讨论 | 第58-66页 |
| 1 SIRT1抑制炎症基因的表达 | 第58-59页 |
| ·SIRT1过表达抑制炎症基因的表达 | 第58-59页 |
| ·SIRT1的激活剂Resveratro]抑制炎症基因的表达 | 第59页 |
| 2 NFAT介导PMA/Io诱导的炎症基因的表达 | 第59-60页 |
| ·PMA/Io激活MAPK-AP-1和Ca~(2+)-NFAT两条信号通路 | 第59-60页 |
| ·NFATc3介导了PMA/Io诱导的炎症基因的表达 | 第60页 |
| 3 SIRT1抑制NFATc3的转录活性 | 第60-62页 |
| ·NFATc3受到转录水平的调节 | 第60页 |
| ·SIRT1去乙酰化转录因子而抑制了它们的转录活性 | 第60-61页 |
| ·SIRT1通过去乙酰化NFATc3而抑制了它的转录活性 | 第61页 |
| ·SIRT1对NFATc3的转录抑制可能并不依赖于AP-1 | 第61-62页 |
| ·SIRT1抑制NFAT和AP-1的转录活性而抑制下游炎症基因的表达可能具有叠加的效果 | 第62页 |
| ·NFATc3的入核可能为SIRT1去乙酰化提供前提条件 | 第62页 |
| 4 SIRT1对炎症的抑制是一个具有负反馈机制的网络 | 第62-64页 |
| ·SIRT1抑制NFAT,AP-1和NF K B的转录活性以及下游炎症分子的表达 | 第62-63页 |
| ·NFAT在转录水平受到去磷酸化和去乙酰化的调节从而影响它的激活和抑制的转换 | 第63页 |
| ·PMA/Io激活NFAT并上调SIRT1的表达而SIRT1抑制NFAT的转录活性形成一个负反馈的环路 | 第63-64页 |
| 5 本研究的不足与进一步研究方向 | 第64-66页 |
| 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 文献综述 | 第71-85页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 英文名词及缩写 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87-88页 |
