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H5N1亚型禽流感病毒对家鸭致病力分子机制的研究

摘要第1-8页
Abstract第8-13页
第一章 绪论第13-25页
   ·A 型流感病毒大记事第13-17页
   ·流感病毒聚合酶的功能第17-20页
     ·引言第17页
     ·病毒复制和转录相关的病毒蛋白第17-18页
     ·病毒转录和复制第18-20页
   ·流感病毒反向遗传操作技术的发展第20-25页
     ·引言第20页
     ·病毒的生命循环第20页
     ·流感病毒拯救的里程碑第20-23页
     ·反向遗传在流感病毒上的应用第23-25页
第二章 H5N1 亚型禽流感病毒对家鸭的致病力实验第25-29页
   ·材料方法第25-26页
     ·实验所用的病毒分离株第25页
     ·病毒分离株的纯化和扩增第25-26页
     ·鸡胚半数感染量测定(EID50)第26页
     ·实验动物第26页
     ·家鸭感染实验第26页
   ·结果与讨论第26-29页
     ·攻毒后家鸭表现的临床症状和对家鸭的致死率第26-28页
     ·讨论第28-29页
第三章 研究 H5N1 亚型禽流感病毒对家鸭的致病力分子机制的模式病毒的筛选第29-38页
   ·材料和方法第29-31页
     ·实验用的毒株(同第二章)第29页
     ·模式毒株选择的依据第29页
     ·实验毒株的基因组相似性分析第29页
     ·模式毒株对家鸭致病力实验及半数致死量的测定(DLD50)第29页
     ·模式毒株对小鼠的致病力实验及半数致死量的测定(MLD50)第29-30页
     ·模式毒株感染家鸭脑组织病理变化第30页
     ·模式毒株精确序列测定第30页
     ·模式病毒编码蛋白序列差异分析第30-31页
   ·结果和讨论第31-37页
     ·13 株病毒基因组相似性比较结果第31-34页
     ·对家鸭致病实验和半数致死量的测定结果第34-35页
     ·GS/H865 和DK/H849 对小鼠的致病力结果第35-36页
     ·GS/H865 和DK/H849 精确序列的测定第36页
     ·GS/H865 和DK/H849 编码蛋白序列差异分析第36-37页
     ·感染GS/H865 和DK/H849 家鸭脑组织的病理变化第37页
   ·讨论第37-38页
第四章 H5N1 亚型禽流感病毒对家鸭致病力分子基础的研究第38-53页
   ·材料和方法第38-41页
     ·模式病毒第38页
     ·实验动物第38页
     ·主要试剂第38页
     ·PBD 双向转录载体第38页
     ·引物第38-39页
     ·病毒RNA 提取、反转录与PCR第39-40页
     ·重组质粒的构建第40页
     ·PA 基因的定点突变第40页
     ·病毒的拯救和鉴定第40-41页
     ·获救病毒对家鸭的致病力实验第41页
     ·PA 蛋白224P 和383D 在自然界的分布第41页
     ·获救的部分毒株对小鼠的致病力实验第41页
   ·结果第41-51页
     ·重组PBD 质粒克隆鉴定结果第41-42页
     ·获救病毒的鉴定结果第42页
     ·获救病毒对家鸭的致病力实验结果第42-51页
   ·讨论第51-53页
第五章 探索 PA 蛋白224和383位氨基酸改变影响 H5N1亚型禽流感病毒致病力的分子机制第53-67页
   ·材料和方法第53-58页
     ·PA 224 和383 位氨基酸突变蛋白对聚合酶活性影响检测第53-55页
     ·WesternBlot 检测PA 和其突变蛋白稳定性实验第55页
     ·PA 224 和383 位氨基酸突变对核定位研究第55页
     ·利用酵母双杂交技术研究PA 蛋白和DKCLE 蛋白的相互作用第55-58页
   ·结果第58-65页
     ·224 和383 位氨基酸的突变对流感聚合酶活性的影响第58-59页
     ·WesternBlot 检测PA 和其突变蛋白稳定性实验结果第59-60页
     ·PA 224 和383 位氨基酸突变对核定位研究结果第60-64页
     ·酵母双杂交比较49-PA 和65-PA 与DK-CLE 蛋白的相互作用第64-65页
   ·讨论第65-67页
第六章 全文结论第67-68页
   ·分析13 株H5N1 对家鸭致病性第67页
   ·H5N1 亚型禽流感对家鸭致病力的分子基础第67页
   ·PA 蛋白224 和383 位氨基酸影响病毒对家鸭致病力机制的探索第67-68页
参考文献第68-75页
附录第75-86页
 附录1 家鸭CLE 基因序列第75页
 附录2 A/Goose/HB/65 全基因序列第75-80页
 附录3 A/Duck/HB/49 全基因序列第80-86页
致谢第86-87页
作者简历第87页

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